[发明专利]一种检测杨树感染腐烂病的方法

权利要求书

1.一种检测杨树感染腐烂病的方法，其特征在于，包括以下步骤：

检测杨树中酶的活性，并根据酶活性的变化，判断杨树是否感染腐烂病；

所述酶为过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、β-1,3-葡聚糖酶、苯丙氨酸解氨酶中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，

所述过氧化物酶的酶活性大于109.64U/g时，杨树感染腐烂病；

所述过氧化氢酶的酶活性大于558.41nmol/min/g时，杨树感染腐烂病；

所述超氧化物歧化酶的酶活性大于634.61U/g时，杨树感染腐烂病；

所述β-1,3-葡聚糖酶的酶活性大于74.49mg/h/g时，杨树感染腐烂病；

所述苯丙氨酸解氨酶的酶活性大于150.98U/g时，杨树感染腐烂病。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，其中，

所述过氧化物酶的酶活性为109.64-190.05U/g时，杨树感染腐烂病；

所述过氧化氢酶的酶活性为558.41-905.37nmol/min/g时，杨树感染腐烂病；

所述超氧化物歧化酶的酶活性为634.61-877.53U/g时，杨树感染腐烂病；

所述β-1,3-葡聚糖酶的酶活性为74.49-91.01mg/h/g时，杨树感染腐烂病；

所述苯丙氨酸解氨酶的酶活性为150.98-234.04U/g时，杨树感染腐烂病。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，

所述酶为过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、β-1,3-葡聚糖酶和苯丙氨酸解氨酶。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，

所述检测部位为杨树中间部位的新鲜叶片或树皮组织。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，其中，

所述过氧化物酶采用过氧化物酶试剂盒进行活性测定，其步骤为：

(1)制备粗酶液：

按照1g：10mL的质量体积比，将叶片或树皮组织加入到提取液中，进行冰浴匀浆后，在4℃下，8000g的离心力下离心10分钟，取上清液，得粗酶液；将粗酶液置冰上待测；

(2)将粗酶液和试剂在25℃下预热10min后，立即混匀并计时，记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2；计算ΔA＝A2-A1；过氧化物酶活性计算公式如下：

POD(U/g鲜重)＝ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.01÷T＝7133×ΔA÷W

式中：V反总-反应体系总体积，单位为mL；V样-加入样本体积，单位为mL；V样总-加入提取液体积，单位为mL；T-反应时间，单位为min；W-样本质量，单位为g。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，其中，

所述过氧化氢酶采用过氧化氢酶试剂盒进行活性测定，其步骤为：

(1)制备粗酶液：

按照1g：5-10mL的质量体积比，将叶片或树皮组织加入到提取液中，进行冰浴匀浆后，在4℃下，8000g的离心力下离心10分钟，取上清液，得粗酶液；将粗酶液置冰上待测；

(2)将粗酶液和试剂在25℃下预热10min后，立即混匀并计时，室温下立即测定240nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，计算ΔA＝A1-A2；过氧化氢酶活性计算公式如下：

CAT(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T＝678×ΔA÷W；

式中：V反总-反应体系总体积；ε-H₂O₂摩尔消光系数，4.36×104L/mol/cm；d-比色皿光径，1cm；V样-加入样本体积，单位为mL；V样总-加入提取液体积，单位为mL；T-反应时间，单位为min；W-样本质量，单位为g。