[发明专利]一种玉米遗传转化方法

权利要求书

1.一种玉米遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)制备转化受体

灭菌：授粉7-13d的玉米棒子用70％的乙醇灭菌10min；

去胚乳：使用无菌水清洗幼胚2-5次，洗掉胚乳，获得幼胚的长度在2-4mm；

2)制备侵染液

取50ml Zm-inf，依次加入Cys 130μl、HCl 130μl、AS 100μl、Vc 25μl，将农杆菌挑至混合液中，制成侵染液；

3)侵染

将调好的侵染液加至放有玉米幼胚的瓶中，放置摇床100rpm侵染20min，之后取出置于无菌滤纸上吹20min；

4)共培养

将步骤3)吹至表面无液体的幼胚，接至放置有一张灭菌滤纸Zm-cocu共培养基上，幼胚盾片朝上，暗处培养3天，除去幼胚上长出的芽，保留淡黄色的幼胚；

5)恢复培养

将共培养后的幼胚取出放置于灭菌皿中，观察幼胚是否膨胀大，边缘是否有愈伤，之后将幼胚放入zm-reco培养基中恢复7d；

6)筛选

第一次筛选：选择出无污染、淡黄色的幼胚接入到第一次筛选培养基中筛选7d；

第二次筛选：第一次筛选后，将幼胚转入到第二次筛选培养基中筛选14d，筛选3-5次，直到筛选到胚性愈伤；

7)分化培养

将获得的胚性愈伤接入分化培养基Zm3中光培养，每12～15d循环继代一次，直到玉米新芽长出到3-4cm；

各步骤中用到的培养基具体配方见下表：

上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：

2.如权利要求1所述的玉米遗传转化方法，其特征在于，所述步骤2)中制备的侵染液OD₆₀₀＝0.8。

3.如权利要求1所述的玉米遗传转化方法，其特征在于，选用的农杆菌为EHA105。

4.如权利要求1所述的玉米遗传转化方法，其特征在于，所述农杆菌携带的抗性基因为潮霉素抗性基因，所述第一次筛选培养基为zm Hn15，第二次筛选培养基为zm Hn30；

上述培养基配方为：

上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：

5.如权利要求1所述的玉米遗传转化方法，其特征在于，所述农杆菌携带的抗性基因为Bar抗性基因，所述第一次筛选培养基为zm basta5，第二次筛选培养基为zm basta10；

上述培养基配方为：

上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：