[发明专利]一种基于糖蛋白密码子优化的狂犬病新型重组疫苗

说明书

本发明公开了一种基于糖蛋白密码子优化的狂犬病重组疫苗，它是以LBNSE‑GL‑G为母本毒株，将LBNSE‑GL‑G株的G基因依据鼠源密码子偏爱性进行序列优化得到OG基因，将LBNSE‑GL‑G株基因组中的两个G基因替换为OG基因，通过反向遗传操作拯救重组病毒，得到LBNSE‑OGL‑OG狂犬病重组疫苗株，所述OG基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。该重组病毒LBNSE‑OGL‑OG具有良好的增殖特性和安全性，并且提高了狂犬病毒糖蛋白的表达量，灭活后肌肉免疫可以增强机体的免疫反应，诱导高水平的中和抗体，提高机体保护率。

技术领域

本发明涉及狂犬病疫苗，尤其是一种糖蛋白密码子优化的新型狂犬病重组疫苗株。

背景技术

狂犬病是由狂犬病毒(Rabies virus，RABV)引起的一种人畜共患传染病，一旦发病死亡率接近100％，严重威胁着人畜安全。近些年，我国平均每年约有700人左右死于狂犬病，位居传染病死亡人数前三位，95％的人类狂犬病死亡是因为带病毒的犬咬伤造成。而在暴露前和暴露后及时接种疫苗可以有很好的保护作用，当前广泛应用的狂犬病疫苗主要是原代细胞培养疫苗和传代细胞纯化疫苗等灭活疫苗，这些疫苗虽然具有安全、有效等优点，但灭活疫苗免疫原性较低，生产工程中往往需要进行病毒浓缩，提高了疫苗生产成本，阻碍了其在发展中国家的使用。另外，对于一些流浪动物及野生动物的免疫接种很难实现，而流浪狗、猫等动物为我国目前主要的传染源，对流浪动物的有效免疫是我国狂犬病防控的关键。因此，发展低毒、高免疫原性的狂犬病疫苗是当前主要目标之一。

反向遗传操作技术的成熟使我们可以更有针对性地对狂犬病毒基因组进行改造以改变病毒的生物学特性，达到增强其安全性及免疫原性的目的。在许多欧美国家，重组狂犬病病毒疫苗已开始应用于狂犬病防控。目前应用的重组狂犬病病毒疫苗包括SAD B19株、RC-HL株(Ito H,Minamoto N,Watanabe T,Goto H,Rong LT,Sugiyama M,Kinjo T,MannenK,Mifune K,Konobe T,et al.Aunique mutation of glycoprotein gene of theattenuated RC-HL strain of rabies virus,a seed virus used for production ofanimal vaccine in Japan.Microbiol Immunol.1994,38:479–482.)、HEP-Flury株(InoueKi,Shoji Y,Kurane I,Iijima T,Sakai T,Morimoto K.An improved method forrecovering rabies virus from cloned cDNA.J Virol Methods.2003Feb；107(2):229-36.)等。其中SAD B19株是1994年Schnell等第一次运用反向遗传技术成功改造并拯救出的狂犬病毒株(Schnell MJ1,Mebatsion T,Conzelmann KK.Infectious rabies virusesfrom cloned cDNA.EMBO J 1994,13(18):4195-203.)。

随后以这些病毒为母本，通过反向遗传学系统构建表达双份狂犬病毒糖蛋白的重组病毒，如LBNSE-GL-G株(Muhammad Tariq Navid,Yingying Li,Ling Zhao,etal.Comparison of the immunogenicity of two inactivated recombinant rabiesviruses overexpressing the glycoprotein.Arch Virol(2016)