[发明专利]一种双抗夹心胶体金检测试剂盒、及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种双抗夹心法胶体金检测的试剂盒，该试剂盒使用了特定成分的金标抗体封闭液、金标抗体稀释液、固定抗体稀释液。该试剂盒通过三种特定成分的试剂，使得原本胶体金检测中的金标抗体和固定抗体能够互换，当使用该三种试剂后，检测灵敏度与原有的胶体金检测结果相比增加或相当。

技术领域

本发明涉及一种双抗夹心胶体金检测试纸条的试剂盒、及其制备方法与应用，属于疫病快速诊断检测领域。

背景技术

目前，在疫病快速诊断检测领域利用双抗体夹心检测抗原较为常见，如吕字华等(参见吕字华等.抗鹅副粘病毒NA-1株单抗及NA-1株抗原检测胶体金试纸条的制备.家畜生产与禽病防治专题,597)中报道的以单克隆抗体-多克隆抗体夹心原理建立的胶体金检测试纸条检测鹅副粘病毒抗原；以及Dong-Jun An等(参见Dong-Jun An等.Animmunochromatography assay for rapid antemortem diagnosis of dogs suspectedto have canine distemper.Journal of Virological Methods,2008,147:244-249)中报道的以单克隆抗体-单克隆抗体夹心原理建立的胶体金检测试纸条检测犬瘟热病毒抗原。其中，以单克隆抗体-单克隆抗体(双单抗)夹心检测抗原最为常见。

但是，现有技术以及反复试验摸索中发现：以双抗体(双单抗)夹心原理涉及的快速检测产品，在确定2种抗体可用于双抗体夹心检测抗原后，研究搭配模式时发现其中1种单克隆抗体只能固定用于标记抗体、另1种单克隆抗体只能作为检测线上固定用抗体，若将2种抗体的搭配模式改变，即将产品中2种单抗的位置互换，则会引起非特异反应或降低灵敏度。

另外，现有胶体金类产品中样品处理液所含成分不一，当处理非针对的动物疫病抗原样本，该抗原未得到充分裂解，且不同试剂盒样品处理液仅针对特定来源的待检样品有效，对其它类型的动物疫病抗原样本未必有效，且商品化胶体金试剂盒的说明书多标有“不能使用其它试剂盒的样品处理液或样本稀释液”之用语，当混杂使用时甚至会导致检测时灵敏度低、敏感性不好，甚至出现非特异反应，影响确诊速度，严重时会使病情恶化并导致疾病肆意传播。

因此，现有技术中缺乏一种能够解决双抗夹心检测抗原时，标记抗体和固定抗体能互换配对的试剂盒，也缺少一种能够解决对不同来源的样品均能充分处理以保证检测效果的试剂盒，还缺少一种能和多种商品化双抗夹心试纸条的配合使用的样品处理试剂盒。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了一种双抗夹心法胶体金检测的试剂盒，其中，所述试剂盒包括双抗夹心法胶体金测试纸条和样品处理液；所述双抗夹心法胶体金测试纸条上的金标抗体使用金标抗体封闭液处理，所述金标抗体封闭液包括磷酸盐缓冲液、大分子蛋白、Tween-20，所述磷酸盐缓冲液为pH7.4 0.1M PBS溶液，所述大分子蛋白为BSA、OVA、胎牛血清、脱脂奶中的任一种；所述金标抗体封闭液优选为pH7.4 0.1M PBS溶液、0.02％～0.1％W/V Tween-20，及0.2％～1.0％W/V BSA、OVA、胎牛血清、脱脂奶中的任一种；所述金标抗体使用金标抗体稀释液稀释，所述金标抗体稀释液包括pH7.4 0.1M PBS溶液、PEG4000、Proclin300，或包括pH7.4 0.1M PBS溶液、PEG6000、Proclin300；所述金标抗体稀释液优选为pH7.4 0.1M PBS溶液、0.1％V/V PEG4000、0.02％V/V Proclin300，或pH7.4 0.1M PBS溶液、0.1％V/V PEG6000、0.02％V/V Proclin300；以及所述双抗夹心法胶体金测试纸条上的固定抗体使用固定抗体稀释液稀释，所述固定抗体稀释液包括pH7.40.1M PBS溶液、糖类稳定剂、Triton-X 100；优选地，所述固定抗体稀释液包括pH7.4 0.1MPBS溶液、蔗糖、Triton-X 100；所述固定抗体稀释液进一步优选为pH7.4 0.1M PBS溶液、0.1％V/V Triton-X 100，及0.5％V/V蔗糖、海藻糖、葡萄糖、山梨醇中的任一种。