[发明专利]与绵羊产羔数性状相关的SNP分子标记及应用

权利要求书

1.基于Sequenom MassARRAY技术开发的用于检测与绵羊产羔数性状相关的SNP分子标记的引物在高产羔数绵羊品种早期筛选中的应用；

所述引物包括正向引物F、反向引物R和延伸引物S，引物序列分别如SEQ ID NO:2-4所示；

其中，所述SNP分子标记位于绵羊如SEQ ID NO:1所示的GLIS1基因序列的第4389位碱基，该处碱基为A或G；所述SNP分子标记的GG或AA纯合基因型对应的绵羊产羔数高于GA杂合基因型对应的绵羊产羔数。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测绵羊的基因组DNA；

2)以待测绵羊的基因组DNA为模板，利用引物F和R，进行PCR扩增反应；

3)用SAP酶对PCR扩增产物进行消化；

4)以消化后的PCR扩增产物为模板，利用权利要求1所述延伸引物R进行延伸反应；

5)分析延伸产物，根据绵羊GLIS1基因型的判定结果，从而判定待测绵羊是否为高产羔数绵羊品种。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤2)中PCR扩增反应使用的反应体系为：基因组DNA 50ng，10×PCR反应缓冲液0.5μL，25mM MgCl₂ 0.4μL，25mM dNTPs 0.1μL，10μMPCR Primer mix 1μL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.2μL，去离子水补齐至5μL；其中，所述10×PCR反应缓冲液为：50mM KCl,10mM Tris-HCl，pH8.0；

PCR扩增反应的扩增程序为；95℃ 2min；95℃ 30s，56℃ 30s，72℃ 60s，45个循环；72℃ 5min。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤3)中对PCR扩增产物进行消化，使用的SAP酶消化体系为：10×SAP Buffer 0.17μL，1.7U/μL SAP酶0.3μL，去离子水补齐至2μL；

反应条件为：37℃ 40min，然后85℃ 15min；25℃保存。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤4)中延伸反应使用的反应体系为：10×iplex Buffer 0.2μL，25μM Terminator mix 0.2μL，5μM Extend primer mix 0.94μL，32U/μL iplex Enzyme 0.041μL，去离子水补齐至2μL；

延伸反应条件为：94℃ 30s；[94℃ 5s，(52℃ 5s，80℃ 5s)5个内部循环]，40个外部循环；72℃ 3min。