[发明专利]检测抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种检测抗‑Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其制备方法和使用方法。本发明提供了一种抗‑Carp抗体的均相免疫检测试剂盒，该试剂盒所采用的检测技术为光激化学发光免疫分析法，为一种均相反应体系，相较于现有的非均相反应体系检测方法，存在着无需清洗、包被/标记工艺对抗原抗体的活性无影响、特异性高、灵敏度好、线性范围宽、背景干扰小、反应速度快、操作简便、技术要求不高等优点，并可实现全自动化高通量测试。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其制备方法和使用方法。

背景技术

抗氨甲酰化蛋白抗体(anti-Carbamylated protein antibody，anti-Carp Ab)是最近几年发现的与类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)疾病诊断和病程监控的密切相关的一个新的生物标志物。氨甲酰化是一种非酶介导的蛋白质翻译后修饰方式，其具体过程是蛋白质的赖氨酸残基在尿素的衍生物一氰酸酯或氰酸盐的作用下转变成高瓜氨酸残基。该过程能打破人体免疫耐受并诱导自身免疫抗体抗-Carp抗体(anti-Carp Ab)的产生。

专利WO2012/105838A1及WO2016/014612A2中公开的anti-Carp Ab的检测方法分别为以氨甲酰化胎牛血清(Car-FCS)和氨甲酰化人类α1抗胰蛋白酶(Car-hAlAT)作为抗原，采用免疫印迹法(Immunoblotting)及酶联免疫吸附法(ELISA)进行测定。

专利WO2012/105838A1中的检测方法存在的缺陷是：1、人体内的anti-Carp Ab是针对自身体内氨甲酰化蛋白所产生的抗体，而氨甲酰化胎牛血清(Car-FCS)作为动物源性的抗原，与人体自身氨甲酰化蛋白所具有的抗原表位并不完全相同；2、氨甲酰化胎牛血清中包含大量可与人类血清样本中anti-CarpAb抗体及其他免疫球蛋白非特异性相互作用的蛋白质及其它复杂组分，导致实验的背景值高，从而对结果分析产生干扰；3、氨甲酰化胎牛血清难以重复制备，存在着批间差异，可能会对实验结果复现性产生影响；4、检测的anti-CarpAb的亚型仅为IgA和IgG、并未对IgM和IgD型抗体进行检测；5、采用免疫印迹法(Immunoblotting)进行检测时实验步骤较为复杂、不同检测机构的实验操作标准不一、耗时长、不能实现全自动高通量分析及采用动物血清作为二抗进行检测时在印迹膜上产生的非特异性检测条带对实验结果的干扰。

专利WO2016/014612A2中的检测方法存在的缺陷是采用的是ELISA间接法对anti-Carp Ab进行检测，检测背景值较高、灵敏度较低、线性范围窄、易产生假阳性的实验结果；同时针对检测不同亚型的抗体，需要采用相应的酶标二抗进行检测，实验操作较为繁琐。

由此可见，现有的抗-Carp抗体检测方法均为非均相反应体系，其存在检测背景值较高、选择性及重复性较差、灵敏度较低、线性范围窄、反应速度较小、易产生假阳性的实验结果等问题。

因此，为了克服现有检测技术中存在的上述缺陷，需要研究开发出一种抗原特异性强、信号放大效果好、灵敏度高、线性范围宽、操作简单、测试更稳定的用于检测anti-Carp Ab的均相免疫化学发光检测试剂盒。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒。该试剂盒采用高灵敏度和特异性的氨甲酰化人血清白蛋白作为抗原结合均相免疫化学发光检测技术制成，其具有特异性强、信号放大效果好、灵敏度高、线性范围宽、操作简单、稳定性好和精密度高的优点。

为此，本发明第一方面提供检测抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的存在的试剂在制备用于采用均相免疫检测方法通过下列步骤评价受治疗者的类风湿性关节炎的试剂中的用途：

a)提供来自怀疑患有类风湿性关节炎的受治疗者的待测样品；