[发明专利]具有人源化的TMPRSS基因的啮齿类动物

说明书

本发明提供了经遗传修饰的啮齿类动物例如小鼠和大鼠，以及用于制备和使用其的方法和组合物。啮齿类动物包含至少一种内源性啮齿类动物Tmprss基因(例如内源性啮齿类动物Tmprss2、Tmprss4或Tmprss11d基因)的人源化。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2016年2月29日提交的美国临时申请号62/301,023的优先权权益，所述美国临时申请的全部内容以引用的方式并入本文。

序列表以引用方式并入

275KB的ASCII文本文件中的序列表命名为33093_10234US01_SequenceListing.txt，于2017年2月13日创建，并且经由EFS-Web提交给美国专利和商标局(United States Patent and Trademark Office)，其以引用的方式并入本文。

背景技术

II型跨膜丝氨酸蛋白酶是特征在于N末端跨膜结构域的蛋白酶家族(Bugge等人，J.Biol.Chem.284(35):23177-23181,2009；Hooper等人，J.Biol.Chem.272(2):857-860,2001)。该家族的所有成员都作为单链酶原表达，并且通过在高度保守的R/(IV)VGG基序内切割而被蛋白酶解激活。家族中的一个成员，跨膜蛋白酶，4型丝氨酸(TMPRSS4)已显示激活上皮钠通道(ENaC)，其调节跨越上皮细胞的钠和水通量(Guipponi等人2002Hum.Mol.Genet.11:2829；Vuagniaux等人2002J.Gen.Physiol.120:191)。TMPRSS4的蛋白酶解激活物是未知的；然而，迄今为止的数据提示该蛋白质是自动激活的。当被激活时，TMPRSS4的催化结构域经由二硫键保持与蛋白质的N末端结合。TMPRSS4、TMPRSS2和TMPRSS11D(或人气道胰蛋白酶样蛋白酶；“HAT”)已在体外显示切割A型流感血凝素(HA)，这是病毒生命周期中的第一个必要步骤。这种切割对于HA的活性是必要的，因为蛋白质作为前体蛋白质(HA0)合成，并且需要切割成HA1和HA2用于活性。在Caco-2细胞中TMPRSS4的RNAi击倒导致病毒传播减少。另外，显示TMPRSS4在感染流感的小鼠的肺中强烈上调(等人2006J.Virol.80:9896；等人2009Vaccine 27:6324；等人2010J.Virol.84:5604；Bertam等人2010J.Virol.84:10016；Bertam等人2010J.Virol.84:10016；等人2011J.Virol.85:1554；Bahgat等人2011Virol.J.8:27)。

需要开发体内系统例如感染的啮齿类动物模型，以便鉴定和测试包括抗体的化合物，所述化合物特异性靶向人II型跨膜丝氨酸蛋白酶，用于治疗和预防病毒感染和其它疾病。

发明内容

本发明涵盖期望改造啮齿类动物以提供用于鉴定和开发新治疗剂的体内系统的认识。例如，本发明涵盖具有人源化的Tmprss基因的啮齿类动物期望用于鉴定和开发用于治疗和预防病毒感染的治疗剂的认识。

在一个方面，本发明提供了其基因组含有人源化的Tmprss基因的啮齿类动物，所述人源化的Tmprss基因包括内源性啮齿类动物Tmprss基因的核苷酸序列和同源人TMPRSS基因的核苷酸序列，其中所述人源化的Tmprss基因处于内源性啮齿类动物Tmprss基因的5'调控序列，例如启动子和/或增强子的控制下。

在一些实施例中，本文公开的啮齿类动物中的人源化的Tmprss基因编码人源化的Tmprss蛋白质，其含有的胞外域与人TMPRSS蛋白质的胞外域基本上相同(例如，在序列中至少85％、90％、95％、98％、99％或100％相同)。在一些实施例中，人源化的Tmprss蛋白质含有的细胞质和跨膜部分与内源性啮齿类动物Tmprss蛋白质的细胞质和跨膜部分基本上相同(例如，在序列中至少85％、90％、95％、98％、99％或100％相同)。