[发明专利]一种快速无损检测三角褐指藻胞内岩藻黄素的方法

说明书

本发明涉及一种快速无损检测三角褐指藻胞内岩藻黄素的方法。本发明实现了三角褐指藻胞内岩藻黄素的快速无损检测，极大地简化了检测步骤，在建立标准曲线后，检测样品时无需对样品进行提取操作，样品前处理简单，缩短了检测时间，同时非常适宜用于微藻细胞尤其是三角褐指藻细胞内岩藻黄素的快速无损检测分析。

技术领域

本发明属于微藻胞内色素的快速无损检测技术，特别涉及一种基于荧光检测技术的快速无损检测三角褐指藻胞内岩藻黄素的方法。

背景技术

岩藻黄素是一种参与光合作用的类胡萝卜素，占自然界总类胡萝卜素的10％以上，广泛存在于褐藻、硅藻和金藻等藻类中。岩藻黄素在藻类细胞中与叶绿素和蛋白组合成一个FCP复合体，在光合作用的光捕获、光能传递、光保护等生理作用中扮演重要的角色。岩藻黄素具有一个独特的丙二烯结构和5,6-环氧结构(化学结构式如下)，区别于其他常见的类胡卜素(如β-胡萝卜素、番茄红素、虾青素等)。

研究证明，岩藻黄素具有显著的抗氧化、消炎、抗癌、减肥等医学功效，并对治疗糖尿病、保肝护肝、抗辐射、保护皮肤、抑制血管增生、脑血管疾病治疗、骨骼保护、保护视力、和抗疟疾等方面具有显著疗效。岩藻黄素强大的抗氧化性能被证明是以食用褐藻中DPPH(1,1-二苯基-2-苦基肼)清除自由基的形式体现的。

海洋硅藻(尤其是三角褐指藻)在混合营养连续培养条件下生物量可高达10g·L^-1～25g·L^-1，经诱导后积累的天然岩藻黄素约占干重的1.5～3％，其含量高于远远高于大型海藻，是岩藻黄素的新来源，安全无毒，有利于降低生产成本。

目前分析测定岩藻黄素的传统方法是高效液相色谱法(HPLC)、紫外光检测法(UV)。HPLC法样品干燥、提取、分析流程时间长，用于岩藻黄素的生产工艺和质量控制费时费力。由于通常岩漠黄质样品自身含有大量的杂色素，而UV法前处理方法又过于简洁，没有对杂色素的干扰采取任何相应的预处理措施，因此存在很大的局限性。

开发一种可提高检测效率、简化检测工序、杂色素干扰少的三角褐指藻岩藻黄素检测方法非常有必要。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷，本发明提供一种快速无损检测三角褐指藻胞内岩藻黄素的方法，该方法检测速度快，检测工序简单，且杂色素干扰少。

本发明的技术目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明所述的快速无损检测三角褐指藻胞内岩藻黄素的方法,包括如下步骤：

S1：建立标准曲线：取含量已知的三角褐指藻悬浮液已知样品，重悬从所述已知样品中收集的藻细胞，调整重悬液中藻细胞的细胞密度，用流式细胞仪检测藻细胞在533nm或585nm发射波长下的平均荧光强度值；将所述三角褐指藻悬浮液样品的岩藻黄素含量的对数值和相应测得的平均荧光强度值的对数值作线性回归,即得标准曲线；

S2：制备待测样品：重悬从待测三角褐指藻悬浮液样品中收集的藻细胞成待测品重悬液，调整所述待测品重悬液中藻细胞的细胞密度，即得待测样品；

S3:用流式细胞仪检测待所述待测样品中藻细胞在在533nm(FL1通道)或585nm(FL2通道)发射波长下的平均荧光强度值，根据步骤S1建立的标准曲线，计算所述待测样品中的岩藻黄素含量。

本发明优选地，所述步骤S1和S2中藻细胞的细胞密度均需调整至6×10⁵～2×10⁶CFU/mL之间。