[发明专利]TROP2蛋白表达量的ELISA检测方法及试剂盒

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，具体是TROP2蛋白表达量的ELISA检测方法及试剂盒，TROP2蛋白表达量的ELISA试剂盒包括TROP2抗体包被96孔反应板；TROP2抗体‑HRP酶标记第二抗体；TMB显色液；H2SO4终止液。本发明提供的一种TROP2蛋白表达量的ELISA检测方法及试剂盒，该检测方法能够快速检测血清中TROP2蛋白表达量，研究显示CD151蛋白在各种肿瘤患者血清中高表达。提示TROP2蛋白作为一种潜在的血清学诊断标志物，可为临床快速诊断、治疗效果判断和预后判断提供参考。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体是一种TROP2蛋白表达量的ELISA检测方法及试剂盒。

背景技术

恶性肿瘤已经成为严重威胁人类健康的主要疾病。我国肿瘤发生人数不断升高，死亡率从70年代的83.65/10万上升到90年代的108.26/10万，上升了29.42％。广西的恶性肿瘤死亡率也呈上升趋势，仅1996年(34700人死亡)就比1991年增加12700人，增长近57.73％；广西的恶性肿瘤死亡标化减寿率为9.88‰；广西居民一生(按出生至74岁计算)死于恶性肿瘤的风险约为1/10左右(累积危险度10.66％)；恶性肿瘤使广西人口平均期望寿命减少2.13 岁。恶性肿瘤引发了沉重的社会经济负担，据估算每年用于癌症病人的医疗费用约800亿元，约占卫生总费用的20％。全国因癌症损失的失能调整生命年为185.1万人年，以此估算的经济损失高达1432.3亿元。肿瘤的早诊早治是目前预防治疗肿瘤的有效手段。

TROP2是上皮细胞膜表面糖蛋白受体，其功能之一是作为细胞内钙信号的跨膜转导子。 TROP2在正常组织中无表达或表达很低，而在各种癌组织中则出现过表达，因此是肿瘤诊断、治疗和预后评价的一个非常有意义的标志物。近年来的研究发现，TROP2的表达与子宫内膜癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、结直肠癌、胃和食管癌、胆管癌、口腔癌、脑胶质瘤和乳腺癌的侵袭和转移有密切关系。TROP2蛋白除了在细胞膜表达外，其分子的胞外片断部分在酶的作用下可发生水解而释放到血循环中，并可能反应肿瘤的发展状态，是一种潜在的血清学诊断标志物。开展TROP2蛋白的表达水平及血清学指标检测，有利于开展临床快速诊断、治疗效果判断和预后判断的研究和应用。目前，国内外报道的TROP2检测方法都不很成熟，而且仅用于科研实验，尚未开发成适用于临床检测的试剂盒，不利于临床常规使用。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中的上述缺陷，提供一种TROP2蛋白表达量的ELISA 检测方法及试剂盒。

为实现上述发明目的，本发明采用了如下技术方案：

一种TROP2蛋白表达量的ELISA试剂盒，包括TROP2抗体包被96孔反应板；TROP2 抗体-HRP酶标记第二抗体；TMB显色液；H₂SO₄终止液；洗涤液；ELISA试剂盒组成：

此外，本发明还提供如下附属技术方案：

优选地，所述的TROP2蛋白表达量的ELISA检测方法，包括如下步骤：

(1)制备ELISA反应试剂和优化反应条件：制备单抗杂交瘤细胞-小鼠腹水模型；单抗杂交瘤-小鼠腹水TROP2抗体的纯化；TROP2抗体-HRP酶标记筛选；纯化TROP2抗体-HRP酶标记结合物；

(2)单抗杂交瘤-小鼠腹水TROP2抗体的纯化；TROP2抗体-HRP酶标记筛选；纯化TROP2抗体-HRP酶标记结合物；

(3)采用ELISA技术对正常对照和待测样本血清中TROP2蛋白进行检测；

(4)抗原抗体结合后留于固相载体；

(5)与酶标抗体反应后形成产物；