[发明专利]一种可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取动物小肠组织，依次进行漂洗、消毒和反复冻融处理；

(2)将动物小肠组织剪断，刮除小肠的黏膜层、肌肉层和浆膜层，得到剥离的小肠黏膜下层，将剥离的小肠黏膜下层浸泡于氯化钠溶液中；

(3)将小肠黏膜下层进行脱细胞处理，然后进行漂洗；

(4)将经步骤(3)处理的小肠黏膜下层置于缓冲溶液中浸泡后，再置于除垢剂中震荡萃取20-30小时，漂洗；

(5)将经步骤(4)处理的小肠黏膜下层置于缓冲溶液中浸泡，然后冷冻干燥、研磨，得到可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒。

2.如权利要求1所述的可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)采用消毒剂进行消毒，所述消毒剂由(Ⅰ)体积分数为5-30％的乙醇水溶液，和(∏)体积分数为0.2-2％的过氧乙酸水溶液和/或体积分数为0.5-10％的过氧化氢水溶液组成；所述步骤(1)中，反复冻融的方法为：将动物小肠组织置于-80℃冰箱中冷冻0.5-3小时，然后取出，于37℃下解冻0.1-1小时；反复冻融的次数为2-5次。

3.如权利要求1所述的可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，将剥离的小肠黏膜下层浸泡于氯化钠溶液中3-6小时，氯化钠溶液中氯化钠的浓度为0.5-3mmol/L。

4.如权利要求1所述的可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，脱细胞处理的方法为：将小肠黏膜下层先置于脱细胞液A中浸泡8-24小时，漂洗，再置于脱细胞液B中浸泡8-24小时；其中，所述脱细胞液A含有下述质量百分比的组分：(a)0.01-1％EDTA三钠或四钠，和(b)2-10％碳酸钠、碳酸钾、磷酸钠或磷酸钾；所述脱细胞液B含有下述浓度的组分：(c)0.8-2mol/L HCl、磷酸、硫酸、醋酸、乳酸或甘醇酸，和(d)0.8-4mol/L氯化钠、氯化钾、硫酸钠或硫酸钾；所述脱细胞液A和脱细胞液B与小肠黏膜下层的体积比均为4-30：1。

5.如权利要求1所述的可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，除垢剂为曲拉通溶液，所述曲拉通溶液中曲拉通的质量百分比为1-4％。

6.如权利要求1所述的可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)为：将经步骤(4)处理的小肠黏膜下层置于缓冲溶液中浸泡10-16小时，然后冷冻干燥、研磨，再筛选粒径为20-200μm的微粒，即为可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒。

7.一种采用如权利要求1～6任一项所述方法制得的可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒。

8.一种植入剂，其特征在于，含有如权利要求7所述的可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒和植入辅料，所述可注射的脱细胞小肠黏膜下层基质微粒的质量与所述植入辅料的体积的比为1：1～10g/mL。

9.如权利要求8所述的植入剂，其特征在于，所述植入辅料包括磷酸盐缓冲溶液、生理盐水、自体富血小板血浆、聚电解质溶液中的至少一种；优选地，所述聚电解质溶液中的聚电解质为氧化纤维素、羧甲基甲壳素、羧甲基壳聚糖、羧甲基纤维素钠、透明质酸、硫酸软骨素、海藻糖钠、聚谷氨酸中的至少一种，所述聚电解质溶液中聚电解质的浓度为0.5-40g/L。

10.如权利要求8或9所述的植入剂，其特征在于，所述植入辅料还包括细胞生长因子、局部麻醉剂中的至少一种；所述植入辅料中，细胞生长因子的浓度为0.1-100mg/L，局部麻醉剂的浓度为0.1-20g/L。