[发明专利]快速鉴别猪圆环病毒1型、2型和3型的HRM检测引物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种快速鉴别猪圆环病毒1型、2型和3型的，其特征在于，其核苷酸序列如下所示：

上游引物P1：5’-GTTGCVGAGMAGHTCCCTG-3’(SEQ ID NO：1)；

下游引物P2：5’-CCATTGTAACCATCCCACCA-3’(SEQ ID NO：2)。

2.一种快速鉴别猪圆环病毒1型、2型和3型的HRM检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有权利要求1所述的HRM检测引物。

3.一种快速鉴别猪圆环病毒1型、2型和3型的HRM检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)从样品中提取病毒核酸；

2)以核酸为模板，利用权利要求1所述的引物对P1和P2以及荧光饱和染料，进行PCR扩增反应获得扩增产物；

3)对扩增产物进行HRM分析，确定病毒类型；上述方法用于非疾病的诊断和治疗。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中PCR扩增的反应体系为：

加ddH₂O补至20ul。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤2)中PCR扩增反应程序如下：94℃预变性5min；94℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸20s，循环35次；72℃终延伸10min。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤3)HRM分析过程中，80℃到95℃以每0.3℃/步的速率进行熔解曲线分析。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤3)中HRM分析的具体分析过程为：在80～95℃熔解温度范围内，若待检测样品熔解曲线有两个熔解峰，则判定待检测样品为猪圆环病毒3型；如果若待检测样品熔解曲线在85～86℃出现一个熔解峰时，则判定待检测样品为猪圆环病毒2型；如果若待检测样品熔解曲线在87～88℃出现一个熔解峰时，则判定待检测样品为猪圆环病毒1型。