[发明专利]胶质瘤预后标志物circ7:42148226|42148468及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种胶质瘤预后标志物circ7:42148226|42148468及应用。即检测胶质瘤来源的circRNAcirc7:42148226|42148468表达量的试剂用于制备胶质瘤患者的预后制剂。通过研究证实胶质瘤中circRNAcirc 7:42148226|42148468表达量较低的患者，拥有更高的术后生存率。通过检测胶质瘤患者胶质瘤组织中circRNAcirc7:42148226|42148468的表达水平，从而对胶质瘤患者做出预后判断。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于胶质瘤预后的血清circRNA标志物、以及检测该标志物的试剂用于制备胶质瘤预后制剂的应用、还有试剂盒。

背景技术

胶质瘤是颅内最常见的发病率和恶性程度较高的颅内肿瘤，目前对胶质瘤的治疗主要是手术切除为主，再辅以放化疗。但是，即便如此患者的复发率依然很高，2年存活率仅为5％，恶性胶质母细胞瘤平均生存期仅为14个月左右。导致胶质瘤难以治愈的主要因素之一是胶质瘤本身呈现侵袭性生长，肿瘤细胞与正常脑组织的界限十分模糊而难以做到手术完全切除；此外，由于胶质瘤细胞的快速增殖导致了局部肿瘤缺氧微环境的形成,在缺氧微环境下存活下来的肿瘤细胞具有更强的肿瘤恶性表型，是胶质瘤复发和术后放化疗抵抗的重要因素。因此，寻找胶质瘤预后标志物对患者进行预后分析，以提高胶质瘤患者的术后生活质量，并相应地选择合理的后续治疗方案，提高生存率，是神经科学领域亟待解决研究任务。

circRNA是一类广泛且多样地存在于哺乳动物细胞中、具有调控基因表达作用的内源性非编码RNA分子，具有共价闭合的环形结构，广泛存在于各种细胞中，也是继microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究热点。近年来，随着深度测序技术的广泛应用和生物物理和信息学技术的快速发展，人们发现人类许多外显子的转录本可被非线性地反向剪接或通过基因重排而形成circRNA，且它们在所有剪接转录本中占了相当大的比例。近年来逐渐发现外泌体中也含有大量的circRNA，可能发挥重要作用。目前，由于circRNA具有丰富性、稳定性、高保守性和时空特异性等特点，在肿瘤诊断标志物方面正发挥越来越大的作用。

发明内容

本发明的第一个目的是：提供一种用于胶质瘤患者预后的脑组织来源的CircRNA标志物circ7:42148226|42148468，其序列如SEQ NO:1所示。

本发明的第二个目的是，提供检测所述的circRNA标志物在胶质瘤组织中表达量的试剂在制备胶质瘤预后制剂中的应用。

本发明的第三个目的是，提供一种胶质瘤预后试剂盒，能够测定胶质瘤组织中的circ7:42148226|42148468的含量。

所述的胶质瘤预后试剂盒，含有检测circ7:42148226|42148468含量的PCR引物。优选引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的胶质瘤预后试剂盒，除circ7:42148226|42148468的引物外，还含有从胶质瘤组织中提取RNA并进行逆转录及荧光定量PCR的所有试剂。包括：

(1)从胶质瘤组织中抽提总RNA所用试剂，包括RNA稳定溶液、Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、无酶水；

(2)以总RNA为模板将circRNA circ7:42148226|42148468逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶以及circRNAcirc7:42148226|42148468所用随机引物；

(3)将cDNA实时定量PCR所用试剂，包括circRNA circ7:42148226|42148468实时荧光定量PCR特异性引物、GAPDH内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水。