[发明专利]头花蓼不同极性部位抑菌作用的谱效学分析方法

说明书

本发明涉及头花蓼不同极性部位抑菌作用的谱效学分析方法。具体的，包括以下步骤：材料提供，药物提取与分离，UPLC分析与质谱分析，最低抑菌浓度的测定，头花蓼不同极性部位各峰与1/MIC之间的偏最小二乘回归分析。本发明通过UPLC‑TOF‑MS质谱联用技术能够全面的分析确定头花蓼不同极性部位的化学成分并结合药效试验，采用PLSR法分析筛选、确定头花蓼中的抑菌物质，从分子化学水平阐明头花蓼在治疗大肠埃希菌、铜绿假单胞杆菌尿路感染药效物质基础。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及头花蓼的药物分析方法，更具体涉及头花蓼不同极性部位抑菌作用的谱效学分析方法。本发明方法能够为头花蓼的深度开发打下坚实基础。

背景技术

头花蓼(Polygonum capitatum Buch-Ham ex D.Don)为蓼科蓼属多年生草本植物。具有清热利湿、利尿通淋之功效，在临床上治疗泌尿系统感染有着显著的效果。以其为原料制成的中成药制剂“热淋清颗粒”2002年进入国家基本药物目录，2004年进入国家基本医疗保险目录。

头花蓼是少数民族地区的常用药，主要用于肾盂肾炎、尿道感染、利尿通淋等症。相关的药理学研究少见，目前仅有任光友等几篇报道。任光友采用大鼠细菌性肾盂肾炎模型进行实验，结果头花蓼水提取物组大鼠尿液中的WBC和BLD与对照组比较明显减少，显示头花蓼水提物对肾盂肾炎具有一定的抗炎作用。任光友等以小鼠腹腔注射大肠杆菌菌液观察5天内小鼠死亡情况，结果对照组死亡率为100％，头花蓼组死亡率分别为20％和50％，显示头花蓼水提物能够对抗大肠杆菌引起的感染。任光友等以头花蓼水提物灌胃给药予家兔，结果，头花蓼水提物组与对照组比较，体温无显著性差异，但能降低静脉注射伤寒副伤寒菌苗引起的家兔的发热体温。任光友等，以头花蓼水提物分别灌胃给药家兔、大鼠，与空白组和速尿对照组比较尿量。结果显示头花蓼水提物对家兔和大鼠无明显利尿作用。徐英春等人采用琼脂稀释法检测了头花蓼对10株淋病奈瑟球菌(淋球菌)的体外抑菌活性，结果头花蓼对淋球菌有抑菌活性。其对10株淋球菌的最小抑菌浓度范围为8～32g/L，平均值为11.2g/L。

中国专利申请公开说明书CN1054899A(中国专利申请号90107810.7，公开日1991年10月2日)中公开了一种泌感灵冲剂、糖浆生产工艺。该生产工艺是以四季草为原料用水煎煮30-60分钟，提取液过滤浓缩，将其上清液减压浓缩成膏，再用60-70％乙醇提取，将乙醇提取液真空干燥，得四季红浸膏，进一步配制成冲剂或糖浆剂，据信该具有解毒、散瘀、利尿、通淋的功效。

中华人民共和国卫生部药典委员会1998年编的中华人民共和国卫生部《药品标准—中药成方制剂》(第十七册)中收载了名为“热淋清颗粒”的中成药制剂，其是通过将头花蓼加水煎煮两次后过滤浓缩制成的。

CN 1481832A(中国专利申请号02129686.3，公开日2004年3月17日)和CN1483466A(中国专利申请号03146381.9，公开日2004年3月24日)公开了头花蓼提取物，其基本上是由以下步骤制备的：a.由头花蓼全草的鲜品或干品用水分两次煎煮或者用醇水混合物分二至三次回流提取，每次1-2小时，合并煎煮液，过滤浓缩至20℃时的相对密度为1.2，喷雾干燥或减压干燥得到；或者，b.由头花蓼全草及其水提药渣经二氧化碳超临界萃取得到。据信此提取物可用于抗菌、抗炎、镇痛、利尿、治疗泌尿系统结石、治疗肾盂肾炎以及前列腺炎。

尽管头花蓼制剂在临床上已有广泛应用，然而其各种有效部位的药效学研究仍然是有深入开展的必要的，例如头花蓼不同极性部位抑菌作用的谱效学分析，仍然是指导头花蓼制剂临床应用的必要手段，建立头花蓼提取物中分离纯化的有效部位的指纹图谱，阐明不同部位所有峰代表的化学成分对抑菌效果的贡献值，揭示头花蓼抑菌的药效物质基础，仍然是本领域技术人员迫切期待的。

发明内容