[发明专利]一种大黄中结合型蒽醌提取纯化方法

说明书

本发明提供一种大黄中结合型蒽醌提取纯化方法，包括(A)取大黄粗粉，用乙醇提取，得乙醇提取液；(B)浓缩乙醇提取液至无醇味，得浸膏；(C)浸膏加水混悬，加氯仿双相萃取数次后分取水层；(D)水层加乙醇至含醇量75％，得乙醇溶液；(E)乙醇溶液加碱调节PH至不再产生沉淀，除去沉淀，用酸调节剩余溶液PH至中性，除去乙醇，加水稀释，得稀释液；(F)稀释液中加入预处理后的大孔吸附树脂，恒温振摇，静置，滤过，得已吸附目标成分的大孔吸附树脂；(G)已吸附目标成分的大孔吸附树脂中加入乙醇，恒温振摇，静置，滤过，得解吸液；(H)解吸液除去乙醇，真空干燥，得结合型蒽醌，结合型蒽醌中8个主要成分的含量总和超过50％。

技术领域

本发明涉及一种提取大黄中有效成分的方法，尤其涉及一种提取纯化大黄中结合型蒽醌的方法。

背景技术

大黄为蓼科植物唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.)、掌叶大黄(Rheum palmatum L.)或药用大黄(Rheum officinale Baill.)的干燥根及根茎。大黄中含有多种成分，包括蒽醌类、蒽酮类、鞣质类、二苯乙烯类、苯丁酮类及色酮类等(唐古特大黄、药用大黄和掌叶大黄的化学成分和生物活性研究[D].高亮亮.北京：北京协和医学院，2012.)，其中蒽醌类、鞣质类成分含量较高，蒽醌类成分含量为2％～5％(大黄中蒽醌类衍生物的亚临界水提取研究[D].毛银春.成都：西华大学，2016)，鞣质类成分含量为10％～30％(大黄中鞣质成分的分离与液相色谱/质谱联用分析[J].丁明玉，倪为为.色谱，2004，22(6)：605-608)。大黄蒽醌类成分分游离型和结合型两种，游离型蒽醌主要为芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚，结合型蒽醌主要为上述5个游离型蒽醌与葡萄糖结合的苷，尽管大黄中游离型蒽醌含量仅占总蒽醌的10％～20％(HPLC法同时测定大黄中芦荟大黄素等11种成分的量[J].毛春芳，施忠，罗琳，等.中草药，2014，45(16)：2400-2403)，但目前研究较多的为上述5个游离型蒽醌，结合型蒽醌的报道较少(HPLC法同时测定不同产地掌叶大黄中10个蒽醌类化合物[J].冯素香，王哲，郝蕊，等.药物分析杂志，2017，37(5)：783-788)，其原因是结合型蒽醌提取纯化比较困难。

大黄中的游离型蒽醌和结合型蒽醌具有不同药理活性(基于化学表征和生物效价检测的大黄配方颗粒质量评价研究[J].谭鹏，张海珠，张定，等.中国中药杂志，2017，42(14)：2683-2690)。近年来的研究也表明，长期过量应用大黄可引起肝肾损害(大黄靶器官及其特殊毒性研究进展[J].杜创.毒理学杂志，2015，29(6)：461-464)，其毒性成分也可能是其所含的蒽醌类成分(中药安全性评价的发展、现状及其对策[J].叶祖光，张广平.中国实验方剂学杂志，2014，20(16)：1-6)，但发挥保护作用的是游离型蒽醌还是结合型蒽醌？产生毒性的是游离型蒽醌还是结合型蒽醌、它们之间有何关系？，这些目前并不清楚。因此，从大黄中提取纯化结合型蒽醌对研究大黄的药效、毒性及毒-效关系具有重要意义。

然而，从大黄中提取纯化结合型蒽醌存在两个技术难点。

第一，结合型蒽醌和鞣质均为水溶性成分，需要经特殊处理才能去除鞣质。通常去除鞣质的方法有：(1)醇溶液调PH法(酸碱沉淀法)；(2)大孔树脂吸附结合型蒽醌；(2)聚酰胺吸附鞣质等。我们在前期研究中发现，单一的方法不能除净鞣质，醇溶液调PH法和大孔树脂吸附法相结合是一种较理想的方法，但动态大孔树脂吸附法操作繁琐。

第二，结合型蒽醌不稳定，提取纯化过程中易失去糖变成游离型蒽醌(优选大黄总蒽醌结肠定位壳聚糖微球的制备工艺[J].刘喜纲，刘沛，陈大为，等.中草药，2015，46(1)：38-42)，导致大黄提取物中的结合型蒽醌占比低。

从目前涉及大黄总蒽醌提取的技术来看，多存在工艺繁琐、不易操作，结合型蒽醌破坏严重，或者两者兼有等问题。

发明内容