[发明专利]磁笔式单人份核酸提取试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了提供一种磁笔式单人份核酸提取试剂盒及其使用方法，包括七连管，所述七连管中预先分装有单人份的核酸提取试剂。本试剂盒采取试剂以单人份预分装的方式，用户只需要加入样本就可以放入配套的磁笔式仪器进行核酸提取，整个过程操作简单，安全无毒，样本量范围大0.005～3mL、提取的核酸纯度高且浓度大，实验结果重复性好，可直接用于酶切、PCR、恒温扩增、分子杂交等各种分子生物学实验。

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，特别涉及一种单人份核酸提取试剂盒。

背景技术

目前提取核酸的方式有手工提取和自动化提取；手工提取有煮沸法，酚-氯仿提取法，离心柱法和磁珠法；其中磁珠法较多用于自动化提取。

其中手工提取：煮沸法虽然使用较为广泛，操作简单，但是提取核酸的纯度较低；酚-氯仿提取法虽然能够去除痰液中多糖以及色素成分，但操作复杂要求高，而且氯仿等化学试剂对有毒；离心柱法需要多次离心，手工操作步骤较多。

目前的磁珠法自动化提取根据移液特点主要分为磁笔式和抽吸式两大类：抽吸式过程残留洗涤液中的盐和乙醇/异丙醇会直接影响后面的洗脱效率和扩增；磁铁设计在侧面的装置残留的液体相对较少，但其洗脱的效率不高，耗时长。另外该类仪器设备成本比较昂贵，所需耗材成本较高。

磁棒式：每一步的液体不会残留，因为磁棒只带走磁珠，然后转移到下一个步骤相应的反应孔中，且其编程简单，易维护；不足之处是：需要提前手工加试剂；样本量受限，只能小于1mL。

现有的磁笔试剂盒采用96孔板作为试剂的容器，受限于96孔板的孔大小(最大为2.2mL)，提取时使用的样本量需在0.005～0.5mL之间，无法操作大样本量的提取。

使用此种磁笔试剂盒，待测样本需离心、去上清、洗涤等繁琐的前处理步骤。目前市面主要流行的磁珠法为手工提取法，已有的少量磁笔试剂盒也需要客户补加醇类试剂，操作繁琐。

另外磁笔试剂盒需要一次一个96孔板，若没有凑齐16个样本，则存在试剂浪费的情况，不够灵活。

现有磁笔产品配有蛋白酶K用于样本裂解，蛋白酶K对温度敏感需低温保存，因此现有磁笔产品需2～8℃储存。

总之，截止目前，没有一种自动化、操作简单、用时短、安全无毒、样本量范围大、核酸纯度高且浓度大、无需在特定实验室进行操作的实验方法。

发明内容

本发明针对上述问题，提出了一种磁笔式单人份核酸提取试剂盒，以解决了现有技术的缺陷，达到无需前处理，使用灵活，保存简单的目的。

本发明采取的技术方案如下：

本发明提供一种磁笔式单人份核酸提取试剂盒，包括七连管，所述七连管中预先分装有单人份的核酸提取试剂。

进一步，所述试剂盒中装有裂解液、清洗液、洗脱液和磁珠，其中裂解液成分不包括蛋白酶K，裂解液包括以下成分：硫氰酸胍3～5mol/L、盐酸胍0～5mol/L、氯化钠0.05～0.3mol/L、乙二胺四乙酸二钠10～30mmol/L、三羟甲基氨基甲烷10～30mmol/L、吐温-20，3～6wt％、聚乙二醇辛基苯基醚1～5wt％。

优选的，所述裂解液包括以下成分：硫氰酸胍3～4mol/L、盐酸胍3～4mol/L、氯化钠0.1～0.2mol/L、乙二胺四乙酸二钠15～30mmol/L、三羟甲基氨基甲烷20～30mmol/L、吐温-20，4～6wt％、聚乙二醇辛基苯基醚1～3wt％。

进一步，清洗液包括第一清洗液和第二清洗液，其中第一清洗液包括以下成分:盐酸胍3～5mol/L、三羟甲基氨基甲烷10～30mmol/L、50～70v/v％的乙醇溶液。

优选的，第一清洗液包括以下成分:盐酸胍3～4mol/L、三羟甲基氨基甲烷10～20mmol/L、50～60v/v％的乙醇溶液。