[发明专利]一种兔金黄色葡萄球菌性肺炎组织灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种兔金黄色葡萄球菌性肺炎组织灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

兔葡萄球菌病是由金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.aureus）引起的一种多症状传染病。该病多发生在温暖潮湿的季节，各个年龄段、多品种的兔均可感染发病。兔葡萄球菌性肺炎以喷嚏、咳嗽和鼻腔浆液性或脓性分泌物为主要临床症状。病兔特征性病变为肺炎，少数病死兔则表现为化脓性肺炎。卫生条件和通风不良的养殖场，生产母兔和种公兔的发病率可高达 60% 以上，病兔死亡率 100%，日龄愈大发病率、死亡率愈高，给养兔业造成严重的经济损失。

兔葡萄球菌病是一种常见病。目前，主要应用抗生素对该病进行防治，抗生素的应用又导致了耐药菌株的产生，使该病在临床上持续存在。因此，提供一种高效的兔葡萄球菌疫苗具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种兔金黄色葡萄球菌性肺炎组织灭活疫苗及其制备方法。

本发明实现上述目的，采用技术方案如下：

一种兔金黄色葡萄球菌性肺炎组织灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：

1. 病料处理

选取自然发病、呼吸道症状明显且经检测为金黄色葡萄球菌感染死亡或濒临死亡的患兔，无菌采集病变组织（气管、肺脏和肝脏），以病变组织和预冷灭菌生理盐水质量体积比（W / V）为 1:1混合，制成组织匀浆并过滤，获得滤液。

2. 病原增殖

将步骤 1 所述滤液接种健康兔使其感染金黄色葡萄球菌，采集感染兔的相关组织（气管、肺脏、肝脏、脾脏和淋巴结），现用或 -20℃ 冷冻保存。

3. 抗原液制备

3.1 将步骤 2 所述新鲜或冷冻的相关组织剔除脂肪和结缔组织，剪成约 1cm³ 的小块，以相关组织和预冷灭菌生理盐水质量体积比（W / V）为 1:5 混合，制成组织匀浆。

3.2 将步骤 3.1 所得组织匀浆连续冻融三次，释放抗原。

3.3 采用两层灭菌纱布在无菌条件下将步骤 3.2 处理的组织匀浆过滤，获得的滤液于 4℃ 静置 24h，去除油脂。再以 4℃，2000rpm，将去除油脂的抗原液离心 1h，去除沉淀，上清即为用于制备疫苗的抗原液。

4. 抗原液灭活

向步骤 3.3 所得抗原液加入甲醛，使其达到 0.4% 的灭活浓度，每隔 3h 摇动一次，4℃ 灭活 72h，获得灭活的抗原液。

5. 疫苗配置

将步骤 4 所得灭活抗原液和氢氧化铝佐剂按体积比（V / V）为 1:1 混合，获得兔金黄色葡萄球菌性肺炎组织灭活疫苗。

6. 疫苗分装

将 5 步骤所得疫苗分装， 2℃～8℃ 冷藏保存，六个月有效。

本发明的优点在于：本发明的疫苗不仅具抗原的特异成分，还具有诱导机体产生天然免疫的非特异成分，能有效地诱导免疫机体产生特异和非特异免疫，有效的提高免疫保护力。

具体实施方式

以下结合实施例，对本发明的技术方案进行详尽地描述。所列举的仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。所描述以本发明的技术方案为基础的实施例，其他人员在无创新性成果前提下取得的所有成果，都属于本发明保护的范围。

实施例1

1. 病料处理

选取自然发病、呼吸道症状明显且经检测为金黄色葡萄球菌感染死亡或濒临死亡的患兔，无菌条件下采集病变组织（气管、肺脏和肝脏），剔除脂肪和结缔组织，取 50g 病变组织，剪碎成约 1cm³ 的小块，加入 50mL 4℃ 预冷的灭菌生理盐水，应用高速组织匀浆机制成组织匀浆。将组织匀浆用一层灭菌纱布过滤，获得滤液。

2. 病原增殖

选取体重约 1.5kg、抗金黄色葡萄球菌抗体阴性的健康兔，经鼻腔（每个鼻孔各接种 150μL）接种步骤 1 所得滤液，使其感染金黄色葡萄球菌。30d 后，无菌条件下采集感染兔的气管、肺脏、肝脏、脾脏和淋巴结，现用或 -20℃ 冷冻保存。

3. 抗原液制备

3.1 将步骤 2 所述新鲜或冷冻的相关组织剔除脂肪和结缔组织，取 200g 组织，剪成约 1cm³ 的小块，加入 1000mL 4℃ 预冷的灭菌生理盐水，在高速组织匀浆机中制备成组织匀浆。

3.2 将步骤 3.1 所得组织匀浆连续冻融三次，释放抗原和相关免疫因子。