[发明专利]一种利用霸王柴无菌苗快速增殖培养无性系的方法

说明书

本发明涉及一种利用霸王柴无菌苗快速增殖培养无性系的方法，属于无性繁殖技术领域。本发明通过对种子浸泡和消毒、无菌苗培养、诱导愈伤组织培养、不定芽分化培养和生根培养各条件的设置，得到的霸王柴生根率高、增殖倍数高的霸王柴，解决了霸王柴种子育苗效率低下且易受环境因素影响繁殖慢的难题，该方法简单易行，成本低廉，增殖与生根效率高，适用于工厂化大规模生产。

技术领域

本发明涉及无性繁殖技术领域，具体涉及一种利用霸王柴无菌苗快速增殖培养无性系的方法。

背景技术

霸王柴为多年生小灌木，耐旱性极强，主要分布于我国西北和内蒙古荒漠地区，是荒漠干旱沙地覆沙地上灌丛植被的主要建群种和优势种之一，霸王柴对环境条件有很好的适应性，耐旱、耐寒、耐贫瘠，而且根系发达，对防沙固沙、防止水土流失、改善环境具有十分重要的作用，根可入药，也是天然的优良牧草，其枝条和嫩叶是荒漠区骆驼和羊的食物来源。因此，该植物不仅在改善环境方面具有很好的生态效益，而且也具有良好的经济效益。

由于生长的外界环境条件恶劣，霸王柴种子在自然条件下难以萌发，所以在霸王柴母株周围很难发现生长的实生苗，是干旱荒漠区面临濒危灭绝的物种之一。霸王柴通常采用种子播种育苗的方法进行苗木繁殖，但这种有性繁殖方法虽然可在较短时间内获得大量苗木，但在种子繁殖过程中容易受外界环境、人为操作、化学药品等不良因素的影响，母本植物的优良的遗传性状容易发生变异、分离，影响霸王柴优良种质资源的保存。而常用普通的无性繁殖方法(扦插繁殖)，霸王柴难以生根，成活率低；且常规主要采用霸王柴无菌苗的叶片进行愈伤组织诱导，而将无菌苗的茎秆及下胚轴丢弃，原料浪费严重。现有技术并没有报道一种高效扩繁霸王柴的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用霸王柴无菌苗快速增殖培养无性系的方法。经本发明方法对霸王柴进行培养，能够获得生根率高、增殖倍数高的霸王柴，解决了霸王柴种子育苗效率低下且易受环境因素影响繁殖慢的难题，该方法简单易行，成本低廉，增殖与生根效率高，适用于工厂化大规模生产。

本发明提供了一种利用霸王柴无菌苗快速增殖培养无性系的方法，包括以下步骤：

1)采用GA₃溶液和水对霸王柴种子依次进行浸泡，所述浸泡重复2次，得到浸泡种子；

2)将步骤1)得到的浸泡种子在体积浓度为75％的乙醇溶液中进行消毒，所述消毒的时间为40s，得到消毒种子；

3)将步骤2)得到的消毒种子在无菌苗培养基中进行无菌苗培养15～20d，得到无菌苗；所述无菌苗培养基以改良MS培养基为基准，包括0.3mg/L的GA₃、5g/L的琼脂和30g/L的蔗糖，pH值为5.8～6.0；

4)由所述步骤3)得到的无菌苗获得外植体，将所述外植体在诱导愈伤组织培养基上进行诱导愈伤培养25～30d，得到愈伤组织；所述外植体包括茎段、叶片和/或胚轴；所述诱导愈伤培养基以改良MS培养基为基准，包括0.1～0.2mg/L的6-BA、0.3～0.5mg/L的NAA和30g/L的蔗糖，pH值为5.8～6.0；

5)将所述步骤4)得到的愈伤组织在第一不定芽分化培养基中进行第一分化培养6～8d，再将所述第一分化培养产物在第二不定芽分化培养基中进行第二分化培养25～30d，得到不定芽；所述第一不定芽分化培养基以改良MS培养基为基准，包括3.0mg/L的KT、0.5mg/L的NAA和4.5g/L的琼脂，pH值为5.8～6.0；所述第二不定芽分化培养基以改良MS培养基为基准，包括3.0mg/L的KT、0.5mg/L的NAA、20g/L的蔗糖和4.5g/L的琼脂，pH值为5.8～6.0；

6)将所述步骤5)得到的不定芽在生根培养基中进行生根培养，得到霸王柴植株；所述生根培养基以改良MS培养基为基准，包括0.3mg/L的IBA和10g/L的蔗糖；

所述改良MS培养基为无机盐减少1/3的MS培养基。