[发明专利]七鳃鳗神经轴体组织特异性表达启动子LIP-P及构建重组质粒载体的方法

说明书

本发明公开一种七鳃鳗神经轴体组织特异性表达启动子LIP‑P，其DNA序列如SEQIDNo.1所示。构建重组质粒载体的方法：以七鳃鳗基因组为模板，以DNA序列分别如SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示的引物进行PCR扩增，回收目的基因；将所回收的目的基因与pMD18‑TVector相连；将连接后的产物转化到DH5α感受态细胞中，获取阳性克隆菌，以分别带有BamHI和HindIII酶切位点的引物进行PCR 扩增并抽提lip‑P‑pMD18‑T质粒；用BamHI和HindIII酶切lip‑P‑pMD18‑T质粒和表达基因质粒；将酶切后的lip‑P片断和表达基因质粒16℃连接4h，通过CaCl2法转化至克隆菌DH5α中，抽提重组质粒载体。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种七鳃鳗神经轴体特异性表达启动子LIP-P及构建重组质粒载体的方法。

背景技术

启动子是基因表达的重要顺式调控元件，基因的表达调控中转录环节是最主要的调控位点，而启动子的调控在转录环节中又占据着十分重要的地位，启动子也是基因工程表达载体的一个重要元件，直接影响基因表达效率。目前，已有将基因构建重组质粒载体通过胚胎显微注射的方法来实现哺乳动物及斑马鱼的基因功能和信号通路研究。但是，用于电转的七鳃鳗细胞是从新鲜的离体组织中消化得到，具有一定的特殊性，为质粒的转染带来较大的技术难度。迄今为止，现有哺乳动物的表达质粒载体携带目的基因在七鳃鳗细胞或个体中不能表达，七鳃鳗基因功能和信号通路研究还没有取得突破性进展。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种七鳃鳗神经轴体组织特异性表达启动子LIP-P及构建重组质粒载体的方法

本发明的技术解决方案是：一种七鳃鳗神经轴体组织特异性表达启动子LIP-P，其特征在于：DNA序列如SEQIDNo.1所示。

一种以上述七鳃鳗神经轴体组织特异性表达启动子LIP-P构建重组质粒载体的方法，其特征在于按照如下步骤进行：

a. 以七鳃鳗基因组为模板，以DNA序列分别如SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示的引物进行PCR扩增，回收目的基因；

b. 将所回收的目的基因与pMD18-TVector相连；

c. 将连接后的产物lip-P-pMD18-T转化到DH5α感受态细胞中，获取阳性克隆菌，以分别带有BamHI和HindIII酶切位点的引物进行PCR 扩增并抽提lip-P-pMD18-T质粒；

d. 分别用BamHI和HindIII酶切lip-P-pMD18-T质粒和表达基因质粒，37℃酶切3h；

e. 将酶切后的lip-P片断和表达基因质粒，16℃连接4h，通过CaCl2法转化至克隆菌DH5α中，抽提重组质粒载体。

本发明的七鳃鳗神经轴体特异性表达启动子LIP-P，其启动子LIP-P重组质粒可与表达基因质粒构建能在七鳃鳗细胞或个体中表达的重组质粒载体，为转基因调控七鳃鳗细胞及个体功能研究和信号通路研究提供依据。

附图说明

图1为本发明实施例构建的启动子- pAcGFP1-1质粒的电泳结果图。

图2为本发明实施例构建的重组质粒载体转染到七鳃鳗髓细胞的示意图。

图3为本发明实施例构建的重组质粒载体转染到七鳃鳗胚胎细胞的示意图。

具体实施方式

1. 本发明的七鳃鳗神经轴体组织特异性表达启动子LIP-P，其DNA序列如SEQIDNo.1所示。