[发明专利]七鳃鳗神经轴体组织特异性表达启动子LIP-P及构建重组质粒载体的方法在审

专利信息
申请号: 201711404548.2 申请日: 2017-12-22
公开(公告)号: CN108004244A 公开(公告)日: 2018-05-08
发明(设计)人: 李庆伟;逄越;高星星 申请(专利权)人: 辽宁师范大学
主分类号: C12N15/113 分类号: C12N15/113;C12N15/66;C12N15/70;C12N15/85;C12N15/89
代理公司: 大连非凡专利事务所 21220 代理人: 闪红霞
地址: 116000 辽宁*** 国省代码: 辽宁;21
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摘要:
搜索关键词: 七鳃鳗 神经 组织 特异性 表达 启动子 lip 构建 重组 质粒 载体 方法
【权利要求书】:

1.一种七鳃鳗神经轴体组织特异性表达启动子LIP-P,其特征在于:DNA序列如SEQIDNo.1所示。

2.一种以权利要求1所述七鳃鳗神经轴体组织特异性表达启动子LIP-P构建重组质粒载体的方法,其特征在于按照如下步骤进行:

a. 以七鳃鳗基因组为模板,以DNA序列分别如SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示的引物进行PCR扩增,回收目的基因;

b. 将所回收的目的基因与pMD18-TVector相连;

c. 将连接后的产物lip-P-pMD18-T转化到DH5α感受态细胞中,获取阳性克隆菌,以分别带有BamHI和HindIII酶切位点的引物进行PCR 扩增并抽提lip-P-pMD18-T质粒;

d. 分别用BamHI和HindIII酶切lip-P-pMD18-T质粒和表达基因质粒,37℃酶切3h;

e. 将酶切后的lip-P片断和表达基因质粒,16℃连接4h,通过CaCl2法转化至克隆菌DH5α中,抽提重组质粒载体。

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