[发明专利]关于CD3×B7H3双特异性抗体定向杀伤膀胱癌细胞PUMC-91的应用

说明书

本发明的目的在于提供一种偶联CD3×B7H3双特异性抗体定向杀伤人移行细胞膀胱癌细胞PUMC‑91的应用，具体为偶联CD3×B7H3双特异性抗体可增强活化T细胞（ATC）对PUMC‑91膀胱癌细胞的杀伤作用，为膀胱癌的靶向治疗提供新的免疫治疗靶点。本发明通过研究证实B7H3在PUMC‑91膀胱癌细胞中高表达；与未偶联CD3×B7H3双特异性抗体的ATC相比，结合CD3×B7H3双特异性抗体的ATC定向杀伤PUMC‑91膀胱癌细胞的能力增强，对PUMC‑91膀胱癌细胞具有显著细胞毒活性。当结合CD3×B7H3双特异性抗体的ATC与肿瘤细胞在效靶比为10:1条件下共培养时杀伤效果明显增加。同时，结合CD3×B7H3双特异性抗体的ATC分泌γ‑干扰素（IFN‑γ）和α‑肿瘤坏死因子（TNF‑α）水平增加。

技术领域

本发明的目的在于提供一种偶联CD3×B7H3双特异性抗体定向杀伤人移行细胞膀胱癌细胞PUMC-91的应用，具体为偶联CD3×B7H3双特异性抗体可增强活化T细胞（ATC）对PUMC-91膀胱癌细胞的杀伤作用，为膀胱癌的靶向治疗提供新的免疫治疗靶点。

背景技术

膀胱癌是男性中第四常见的癌症，女性中第11常见的癌症。2017年在美国估计有79030例新发膀胱癌病例和19870例死亡病例，其中男性发病率和死亡率高于女性4倍。最初，约85%的膀胱癌患者被诊断为浅表性膀胱癌，超过50%的浅表性膀胱癌会复发，并且，仅有46%的三期患者和15%的4期患者可以达到五年生存。因此，膀胱癌患者所面临的形式非常严峻。尽管存在多种治疗方法，比如说手术，放疗，化疗，膀胱癌的术后生存率依旧很不理想。这些治疗方法可以限制肿瘤的发展及生长，但它们无法遏制肿瘤的复发和耐药的产生。因此，发展新的疗法对膀胱癌患者是至关重要的。

随着免疫学的研究进展，免疫治疗被公认为二十一世纪肿瘤综合治疗模式中第四种治疗方法。例如，靶向CTLA-4（细胞毒性T淋巴细胞抗原4）和PD-1/PD-L（程序化细胞死亡1/ PD-1配体）的免疫检查点抑制剂已经促进了癌症的治疗，另一个有效的方法是靶向T细胞抗原受体T细胞（TCR）和肿瘤相关抗原（TAA）的双特异性抗体（BiAb）的运用。

在过去两年里，双特异性抗体靶向不同的肿瘤相关抗原，包括EGFR,Her2,CD19,CD20,CD30,CEA,CA125,PSA等已在实验和临床研究中取得令人鼓舞的成果。B7H3，也称为CD276，与B7家族有着高达30%相同的氨基酸。它高度表达在多种类型的癌症中，并已被证明能促进肿瘤的进展和癌细胞的转移，包括急性白血病，胶质瘤，肝细胞癌，肺癌，乳腺癌，前列腺癌，骨肉瘤，皮肤黑色素瘤和胰腺癌。Luo等人证明了小鼠B7H3的基因转移产生了有效的抗肿瘤免疫反应，Lupu等在小鼠原位结肠癌模型中注射含B7H3的腺病毒，发现可抑制肿瘤的转移，MJ18，一种抗B7H3鼠抗，在胰腺癌模型中被证明可抑制肿瘤的生长。研究结果表明B7H3有望用于基于免疫的抗肿瘤治疗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种偶联CD3×B7H3双特异性抗体定向杀伤人移行细胞膀胱癌细胞PUMC-91的应用。

优选地，所述膀胱癌细胞为PUMC-91人移行细胞膀胱癌细胞。

优选地，所述偶联CD3×B7H3双特异性抗体的结构如图1。

优选地，所述双特异性抗体可增强活化T细胞对PUMC-91人移行细胞膀胱癌细胞的杀伤作用。

优选地，所述活化T细胞分泌γ-干扰素和α-肿瘤坏死因子水平增加。

优选地，所述结合CD3×B7H3双特异性抗体的活化T细胞与肿瘤细胞在效靶比为10:1时，杀伤作用明显增加。