[发明专利]一种免离心制备纯化多肽或PEG修饰的金纳米颗粒的方法

说明书

本发明公开了一种免离心制备纯化多肽或PEG修饰的金纳米颗粒的方法，首先制备金纳米颗粒；然后采用弱的保护剂对金纳米颗粒进行保护；再将弱的保护剂保护的金纳米颗粒通过多肽或PEG进行修饰，多肽或PEG修饰后的金纳米颗粒通过免离心的方法进行纯化；纯化方法为：向多肽或PEG修饰后的金纳米颗粒悬浮液中加入盐酸，调节pH值为酸性至其颜色变为蓝灰色，静置，待其沉淀，吸走上清液即完成纯化；该方法处理过程简单，耗时短，从根本上避免了长时间离心对纳米体系稳定性带来的破坏。

技术领域

本发明涉及的是一种免离心制备纯化多肽或PEG修饰的金纳米颗粒的方法。

背景技术

由于胶体金纳米颗粒具有独特的光学性质、极高的摩尔消光系数、良好的生物相容性、表面易修饰等特点，其在分析化学，生物化学，药物学临床医学、免疫标记检测、食品安全检测等领域得到了广泛的应用。

小尺寸的金纳米颗粒有更大的比表面积，更容易通过细胞膜甚至核孔，因此，小粒径的金纳米颗粒在生物研究中，如定向药物运输、X光增强治疗等研究中，有更好的应用前景。

用于生物方面的金纳米颗粒通常需要进行修饰，以赋予其稳定性和靶向性等。巯基多肽等小分子具有良好的生物相容性，含有两个甚至多个功能基团，常用于修饰金纳米颗粒。然而粒径较小的金纳米颗粒的分离是实验中最常遇到的难题之一。常用的分离功能化的小粒径金纳米颗粒的方法有离心、电泳、透析和色谱法等。然而这些方法有很多局限性，离心纯化的方法对于直径为10nm的金纳米颗粒，其分离转速通常在1.5万/分钟(以Eppendorf 5415R为例)以上，对于粒径小于5nm的金纳米颗粒，分离转速约为2-3万转/分钟，这往往超出了实验室离心机的最大转速，而透析发、电泳法和色谱法通常比较耗时，其分离所得产物仍需进一步纯化和浓缩。

发明内容

针对现有技术对多肽修饰的小尺寸金纳米颗粒分离费时费力的局限性，本发明要解决的问题是提供一种免离心制备纯化多肽或PEG修饰的金纳米颗粒的方法。

一种免离心制备纯化多肽或PEG修饰的金纳米颗粒的方法，其特征在于：首先制备金纳米颗粒(不包括通过一步法制备的巯基配体修饰的金纳米颗粒，因为巯基修饰的金纳米颗粒表面的配体不容易被取代)；然后采用弱的保护剂对金纳米颗粒进行保护；再将弱的保护剂保护的金纳米颗粒通过多肽或PEG进行修饰，多肽或PEG修饰后的金纳米颗粒通过免离心的方法进行纯化；纯化方法为：向多肽或PEG修饰后的金纳米颗粒悬浮液中加入盐酸，调节pH值为酸性至其颜色变为蓝灰色，静置，待其沉淀，吸走上清液即完成纯化。

所述的方法，所述金纳米颗粒由柠檬酸钠还原法或硼氢化钠还原法制得。

所述的方法，金纳米粒子表面弱的保护剂为柠檬酸钠或碳酸钾，金纳米粒子粒径小于等于13nm。

所述的方法，金纳米粒子粒径为13nm和8nm。

所述的方法，多肽修饰的金纳米颗粒为谷胱甘肽和CALNN修饰的金纳米颗粒，多肽GSH和CALNN均为多功能配体，同时含有巯基和羧基，巯基通过形成稳定的Au-S键将多肽连接到金表面，而末端羧基可以为纳米粒子提供纯的负电荷。

所述的方法，配体限于同时含有巯基羧基双功能基团的多肽或PEG,且整体表现为负电荷。

该方法处理过程简单，耗时短，从根本上避免了长时间离心对纳米体系稳定性带来的破坏。

附图说明

图1为13nm的金纳米颗粒TEM图。

图2为13nm的金纳米颗粒经CALNN修饰后，在酸性溶液中的颜色，a为红色，b蓝灰色。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

实施例1：