[发明专利]基于血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，且特别涉及一种基于血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块。

背景技术

脱落细胞学检查是肿瘤诊断有效手段之一，普通涂片制作过程中吸取的少量胸腹水不能代表整个胸腹水的状况，且制作完毕之后剩余的胸腹水往往被遗弃，而细胞蜡块可以收集送检胸腹水中的绝大部分细胞，以便观察大部分细胞的形态，且细胞蜡块易于保存，大大提高了细胞病理学诊断的敏感性和特异性，弥补了常规细胞涂片制作有限而不够作多种染色的不足之处，可进行进一步研究和前瞻性研究。

但现有的细胞蜡块制作中固定时间长，细胞丢失明显，影响诊断结果，同时，现有的血性细胞样本中由于存在大量的红细胞，影响蜡块的质量以及诊断结果，对某些疑难病例需要做细胞免疫组织化学染色时也会影响对阳性结果的判断。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细胞蜡块，其可永久保存，细胞成分多，细胞结构完整，高倍背景清晰，有效提高诊断的准确率。

本发明的另一目的在于提供一种基于血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法，其制备效率高，操作简便，有效解决上述问题。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

本发明提出一种基于血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法，其包括：

将血性细胞样本经第一固定液液清洗后，第一次离心，收集第一沉淀样本，加入第二固定液，混合均匀后，第二次离心，得第二沉淀，将第二沉淀脱水、透明、浸蜡以及包埋。

其中，第一固定液为乙醇乙酸液，乙醇乙酸液由体积分数为24-25.5％的乙醇与乙酸按照体积比为18-19：1混合而得。

本发明提出一种由上述制备方法制得的细胞蜡块。

本发明实施例的基于血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块的有益效果是：

通过在将血性细胞样本经第一固定液清洗时，一方面有效破坏红细胞，使高倍背景清晰，防止红细胞的干扰，另一方面有效固定所需要的细胞，例如肿瘤细胞等，防止其自溶。提高蜡块细胞的富集。

通过第一次离心，去除大部分红细胞后，收集第一沉淀样本，通过与第二固定液的配合，进一步有效提高有形的所需细胞的固定，将破碎的细胞去除，进一步提高蜡块细胞的完整性。

由上述方式制得的细胞蜡块，其可永久保存，细胞成分多，细胞结构完整，高倍背景清晰，有效提高诊断的准确率。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的基于血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块进行具体说明。

本发明提供一种细胞蜡块，其细胞成分多，细胞结构完整，高倍背景清晰，有效提高诊断的准确率，用于应用于病理学的检测研究等，其由以下方法制得：

S1.将血性细胞样本经第一固定液清洗后，第一次离心，收集第一沉淀样本。

由于血性细胞样本中含有大量的红细胞，而红细胞的存在对于蜡块的质量以及诊断结果，以及对某些疑难病例需要做细胞免疫组织化学染色时也会影响对阳性结果的判断都存在不良的影响。因此，采用第一固定液对于红细胞进行破坏，使得制得的蜡块的切片的高倍背景清晰，便于精准的观察以及诊断。

优选地，第一固定液为乙醇乙酸液。其中，乙醇对组织细胞的处理既有固定作用又有脱水作用，乙醇借沉淀作用使蛋白质变性，乙酸又名冰醋酸，其不能沉淀白蛋白，但能沉淀核蛋白，渗透性强，固定快，能使红细胞膨胀而破碎，与乙醇配合使用效果佳。因此，在将血性细胞样本经第一固定液清洗时，一方面有效破坏红细胞，使高倍背景清晰，另一方面有效固定所需要的细胞，例如肿瘤细胞等，防止其自溶。

将血性细胞样本经第一固定液清洗时，可进行振荡，有效促进乙醇乙酸液破坏红细胞，同时便于操作，有效节省制备的时间以及工艺。

本发明较佳的实施例中，乙醇乙酸液由体积分数为24-25.5％的乙醇与乙酸按照体积比为18-19：1混合而得。可选地，乙醇乙酸液与血性细胞样本的体积比率应为12-16:1，有效破坏红细胞，同时经第一次离心，使破碎的红细胞随上清液去除，提高最后细胞蜡块的精准性。

优选地，本发明较佳的实施例中，第一次离心为在2900-3100r/min的条件下离心5-6min，有效使有效细胞沉淀，去除破碎的红细胞等，收集第一沉淀样本，同时，在该离心范围内有效防止所需要的有效细胞破裂。