[发明专利]一种用于FMDV和SVA鉴别的试剂、方法及应用

说明书

本申请公开了一种用于FMDV和SVA鉴别的试剂、方法及应用。本申请的试剂包括FMDV引物探针组和SVA引物探针组；FMDV引物探针组的上下游引物分别为Seq ID No.1和2所示序列，探针为Seq ID No.3或其反向互补序列；SVA引物探针的上下游引物分别为Seq ID No.4和5所示序列，探针为Seq IDNo.6或其反向互补序列。本申请的试剂，能同时对FMDV和SVA进行检测和鉴别，特异性强、灵敏度高，为口蹄疫病毒和猪A型塞内卡病毒的鉴别检测提供了一种高效技术手段。本申请的试剂，适用于两种疫病的快速鉴别检测。

技术领域

本申请涉及口蹄疫病毒和猪A型塞内卡病毒检测鉴别领域，特别是涉及一种用于FMDV和SVA鉴别的试剂、方法及应用。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,缩写FMD)是由口蹄疫病毒 (Foot-and-mouthdisease virus,缩写FMDV)引起的一种感染猪、牛、羊等偶蹄动物的急性、热性、接触传染性动物疫病，染病动物出现高热，临床症状以口腔黏膜、乳头皮肤及蹄冠部皮肤出现水泡及糜烂为主要特征，幼畜出现出血性胃肠炎和心肌炎。世界动物卫生组织(OIE)将口蹄疫列为法定报告疫病，我国将其列为一类动物疫病。

猪A型塞内卡病毒(Senecavirus A,缩写SVA)与FMDV、猪水泡病病毒 (缩写SVDV)同属小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)。在2007年之前，SVA 主要作为溶瘤细胞被研究，用于治疗某些神经内分泌肿瘤，一直被认为是一种非致病性病毒。但是，之后的研究显示，猪鼻镜出现水泡，蹄部冠状带溃烂等类似水疱病症状，这些样品通过PCR检测确定为SVA阳性。事实表明，SVA并不是非致病性病毒，SVA曾在巴西大规模爆发，导致仔猪死亡，造成严重的经济损失。并且，我国部分地区也相继出现猪场感染SVA的情况，因此有必要研发相应的检测、鉴别试剂或方法。

由于SVA是一种新发现的动物传染病，染病猪临床症状主要表现为鼻镜及蹄部冠状带处出现水泡、溃烂创面等水泡性病变，与FMDV造成的口蹄疫极为相似，若未能及时作出准确的鉴别诊断，将会导致防控措施采取不当，进而造成严重的后果。因此，亟需建立能够同时鉴别检测FMDV和SVA的方法或试剂盒，以便于科学合理应对FMDV和SVA的疫病防控。

发明内容

本申请的目的是提供一种用于FMDV和SVA鉴别的试剂、方法及应用。

本申请采用了以下技术方案：

本申请的一方面公开了一种用于FMDV和SVA鉴别的试剂，该试剂包括可以进行双重实时荧光RT-PCR检测FMDV和SVA的FMDV引物探针组和SVA 引物探针组；FMDV引物探针组由FMDV特异性引物对和FMDV特异性探针组成，FMDV特异性引物对的上游引物为Seq IDNo.1所示序列，下游引物为Seq ID No.2所示序列，FMDV特异性探针为Seq ID No.3所示序列或者Seq ID No.3所示序列的反向互补序列；SVA引物探针组由SVA特异性引物对和SVA特异性探针组成，SVA特异性引物对的上游引物为Seq ID No.4所示序列，下游引物为 Seq IDNo.5所示序列，SVA特异性探针为Seq ID No.6所示序列或者Seq ID No.6 所示序列的反向互补序列；FMDV特异性探针和SVA特异性探针，两者具有不同的荧光基团，具有相同或不同的荧光淬灭基团。其中，由于两条探针是用于双重实时荧光RT-PCR检测，所以，两条探针具有不同的荧光基团；至于荧光淬灭基团可以相同也可以不同，在此不做具体限定。

Seq ID No.1：5’-CAGGATGATGATTGGCAGAT-3’

Seq ID No.2：5’-ATCTTTGCCAATCAACATCA-3’

Seq ID No.3：5’-TGCACTCAAACAACGGACCGC-3’