[发明专利]一种脐血调节性T细胞体外扩增方法

说明书

本发明公开了一种脐血调节性T细胞体外扩增方法，它包括步骤：新鲜脐血，经Ficoll密度梯度离心法分离获得单个核细胞，将单个核细胞接种至预先包被anti‑CD3抗体的培养皿中，添加诱导培养液诱导Tregs细胞的体外扩增。本发明提供的方法能够自新鲜脐血中体外高效扩增获得高纯度的Tregs细胞。

技术领域

本发明涉及调节性T细胞的体外扩增方法，尤其涉及一种脐血调节性T细胞体外扩增方法。

背景技术

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（ regulatory T cells, Tregs）是一种T细胞亚群，可以通过多种方式抑制免疫反应，包括分泌抑制性细胞因子IL-10、TGF-β等；大量消耗维持炎症细胞生存的细胞因子IL-2；细胞表面的接触抑制。

当体内Tregs缺乏或者细胞功能缺失后，机体会产生自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎（RA），重症肌无力（MG），多发性硬化症（MS），糖尿病，系统性红斑狼疮（SLE）等。Tregs尤其抗原特异性的Tregs在治疗自身免疫性疾病疾病中具有良好的发展前景。Anderton与Bykovskaya等体外扩增SLE病人外周血来源的CD4+CD25+Foxp3+CD127low Tregs 后，输注至病人体内后，发现病人体内的Tregs数目增长1.5-2倍，并未出现副作用，且降低了病人疾病复发率，有效弥补了病人外周血中Tregs细胞的功能。体外通过树突状细胞（DendriticCells, DC）刺激产生胰岛特异的CD4+CD25+CD62L+Tregs细胞能够恢复非肥胖糖尿病小鼠的血糖水平。向I型糖尿病（T1D）患者体内输注体外扩增的自体CD4+CD25+ CD127low Tregs后，2年内个别患者体内C肽水平能够维持正常水平，且不产生任何副作用。