[发明专利]磷酸化TP2多糖及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种具有抗炎活性的磷酸化TP2多糖的制备方法及其应用，所述TP2多糖来源于脆弱拟杆菌ZY‑312，磷酸化试剂由三聚磷酸钠与三偏磷酸钠以质量比混合而成，磷酸化试剂使用量为0.1～0.15g/mL，多糖浓度0.01～0.02g/mL，多糖溶液与磷酸化试剂混合均匀，调节溶液pH值为8.0～9.0，进行反应，乙醇溶液醇沉，收集沉淀，冷冻干燥，复溶，透析，冷冻干燥得到磷酸化TP2多糖。所述磷酸化TP2多糖具有比TP2多糖更高的抗炎症性肠病活性。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及脆弱拟杆菌的应用技术领域，特别是涉及一种磷酸化TP2多糖及其制备方法和应用。

背景技术

炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)是一组病因尚不明确的慢性肠道炎症性疾病，其病因和发病机制复杂，与免疫、遗传、环境、微生物感染等因素有关。近年来研究发现免疫因素在炎症性肠病的发病以及变化中发挥着重要的作用，包括辅助性T细胞、调节性T细胞、细胞因子和自身抗体等。

研究表明脆弱拟杆菌荚膜多糖可通过抑制IL-17的产生来减轻动物肠道炎症；也有研究表明脆弱拟杆菌荚膜多糖可治疗结肠炎。

多糖是具有复杂结构的大分子化合物，具有多种生物活性，如免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等，且其生物活性的发挥与其特定的结构具有密切的关系，提取获得的天然多糖的生物活性有限，可通过化学修饰达到生物活性增强的目的。目前，磷酸化多糖作为多糖的重要衍生物，主要研究在于具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒等多种生物活性，因此对多糖进行磷酸化修饰，并探讨其修饰前后生物活性的变化是目前多糖构效关系研究的重要内容。而目前为止，尚未见关于脆弱拟杆菌荚膜多糖磷酸化修饰的相关报道。

目前，国内外对脆弱拟杆菌荚膜多糖的应用研究主要集中在预防治疗炎症、增强免疫、多发性硬化、哮喘、抗脓肿等方面。通过对脆弱拟杆菌荚膜多糖(TP2多糖)的化学修饰来增强其生物活性的研究报道较少。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种具有防治炎性肠病的磷酸化TP2多糖的制备方法，以开发一种新的抗炎药物。

一种具有抗炎症性肠病活性的磷酸化TP2多糖的制备方法，包括以下步骤：

(1)磷酸化试剂的制备：三聚磷酸钠和三偏磷酸钠混合，用水溶解，配置磷酸化试剂，磷酸化试剂的浓度为0.1～0.15g/mL；

(2)TP2多糖的制备：对保藏编号为CGMCC No.10685的脆弱拟杆菌ZY-312的菌泥进行热水浸提，超滤浓缩，酸解，超滤除盐，柱层析，冷冻干燥，得到TP2多糖；

(3)在磷酸化试剂中加入冻干的TP2多糖，溶解得溶液，溶液中的所述TP2多糖浓度为0.01～0.02g/mL；

(4)调节溶液的pH值为8.0～9.0，进行反应后，取出，冷却至室温；

(5)往溶液中缓慢加入3～4倍95％的乙醇溶液，静置；离心，取沉淀，置于50±3℃的环境下2～3h，以去除残留的乙醇，冷冻干燥；往冷冻干燥后得到的多糖中加入超纯水，复溶，透析，冷冻干燥得到磷酸化TP2多糖。

在其中一个实施例中，所述三聚磷酸钠和三偏磷酸钠的质量比为5～6:1。

在其中一个实施例中，所述脆弱拟杆菌为已有的保藏编号为CGMCC No.10685的脆弱拟杆菌ZY-312。

在其中一个实施例中，所述反应的条件为：置于80～85℃环境下，反应5～6h。

在其中一个实施例中，步骤(5)中，在50～60℃的环境下复溶，转移至截留分子量为10000～14000D的透析袋中透析48±2h，冷冻干燥得到磷酸化TP2多糖。

本发明的另一目的是提供一种磷酸化TP2多糖，即由上述制备方法的得到的磷酸化TP2多糖。