[发明专利]一种表皮细胞生长因子的制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种表皮细胞生长因子的制备方法及应用，将冷冻的乳样4℃解冻后，进行离心、透析、提取、纯化步骤，得到纯化表皮生长因子因子溶液，具有操作方法简便、提取的EGF的生物适应性高等优点，且该方法提取纯化的表皮生长因子溶液可以根据给药形式来确定其制剂的剂型，可接受药典上的赋形剂、稀释剂、载体等，通过口服给药的方式使EGF的功效能作用于全身，改变了EGF传统的给药方式，更好的发挥抗衰老作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种提高人体细胞生长的速度、具有抗衰老作用的表皮细胞生长因子(EGF)的制备方法及应用。

背景技术

表皮细胞生长因子(EGF)是强有力的促细胞分裂因子，短时间作用可增强细胞对无机离子和氨基酸的转移，长时间作用可促进细胞合成核酸及蛋白质，促进细胞分裂。研究表明，极微量的EGF即能强烈刺激细胞生长，抑制衰老基因表达，阻止皮肤衰老，使皮肤各组分保持最佳生理状态。EGF的发现，揭示了人体皮肤衰老的奥秘，是人类第一次认识到皮肤的衰老可以逆转，皮肤可以再变年轻。

EGF是维持生物体正常生理状态的必要物质之一，鹿茸作为鹿体最活跃的生长部位贮存有大量的EGF，在临床治疗方面具有广阔的发展前景，然而在鹿茸中提取，会造成对鹿的伤害。另外，目前市场上关于EGF的产品大都是通过皮肤给药形式，主要用于术后伤口愈合以及疤痕修复，作用局限性太大。

发明内容

本发明针对现有技术存在的不足，提供一种表皮细胞生长因子的制备方法及应用，操作简单可获取无毒无残留的表皮生长因子，其工艺步骤如下：

(1)材料选取

健康奶羊的乳液，人工挤奶方式取样，采样时弃去前5把奶，采样后立即在-40℃冷冻保存备用；

(2)离心处理

将冷冻的乳样4℃解冻后，用移液枪吸取乳样置于离心管中，然后在5000r/min低温(4℃)在高速冷冻离心机中离心10min，除去上层乳脂，取上清液；

(3)透析

将所述上清液装入截留分子量3500Da的透析袋，4℃对0.02mol/L Tris-HCL(8.0)透析30～50分钟，然后更换缓冲液重复透析，得到透析液；

(4)提取

将所述透析液过Q Sepharose Fast Flow柱(5.5cm*20cm)，进行洗脱，流速2～4ml/分钟的流速，先用300～500ml 0.002mol/LTris-HCL(pH8.0)缓冲液洗脱杂蛋白峰、450～650ml 0.5mol/L NaCl的0.002mol/LTris-HCL(pH8.0)的缓冲液进行洗脱，收集目标蛋白峰，并用紫外检测仪在280nm波长处进行检测。

优选的，所述透析步骤中，透析次数为4-8次。

优选的，所述透析步骤中，透析次数为6次。

优选的，还包括纯化步骤，将收集到的目标蛋白峰即表皮生长因子，装入截留分子量3500Da的透析袋，4℃对0.02mol/LTris-HCL(8.0)透析30～50分钟，然后更换缓冲液重复透析4～8次，得到纯化表皮生长因子因子溶液。

通过对表皮细胞生长因子运用冻干技术和脂质体包埋技术获得表皮生长因子新剂型，根据给药形式来确定其制剂的剂型：赋形剂、稀释剂、载体等，通过口服给药的方式使EGF的功效能作用于全身。

本发明的有益效果是：1、在羊奶中提取表皮生长因子，避免了对鹿的伤害，同时羊奶获取方式更容易。2、改变EGF传统的给药方式，通过冻干技术和脂质体包埋技术制备EGF新剂型，旨在通过口服给药的方式使EGF的功效能作用于全身，更好的发挥抗衰老作用。

具体实施方式

最佳实施例：