[发明专利]一种隐形化脑靶向雷公藤甲素纳米脂质体及制备方法

权利要求书

1.一种隐形化脑靶向雷公藤甲素纳米脂质体Lf-PEG-TP，其特征在于，采用共价偶联法将脑靶向配体Lf连接到PEG-TP纳米脂质体表面制得隐形化脑靶向雷公藤甲素纳米脂质体Lf-PEG-TP，所述隐形化雷公藤甲素纳米脂质体PEG-TP，以纳米雷公藤甲素脂质体为药物载体，用聚乙二醇PEG进行隐形化修饰制得；

隐形化雷公藤甲素纳米脂质体PEG-TP的制备方法包括：选择薄膜分散-超声法；磷脂/胆固醇比为2：1；氯仿用量为20ml；载药温度为40℃；载药时间为60min；药脂比为l：50；按质量比为HSPC：Chol：DSPE-PEG2000＝4：2：1分别称取氢化大豆卵磷脂、胆固醇、聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺为制备脂质体的膜材，以及为氢化大豆卵磷脂总质量的1/50的雷公藤甲素；溶于体积比为2/1的氯仿/甲醇混合溶剂中；将该混合溶剂置于l00ml磨口圆底烧瓶中，40℃恒温水浴减压旋转蒸发，除去氯仿；至圆形瓶壁上形成均匀脂质薄膜，将15mlPBS缓冲溶液加入圆底烧瓶，于40℃恒温水浴上旋转水合60min；使脂质体膜脱落，得混悬液；冰浴下，探针超声，工作2秒，停3秒，共超声10分钟；0.22μm微孔滤膜，即得PEG-TP纳米脂质体；其中所述40℃恒温水浴减压旋转蒸发，除去氯仿中，旋转速度为100rpm；所述将15ml PBS缓冲溶液加入圆底烧瓶中，pH为7.4；采用共价偶联法对已制备的PEG-TP纳米脂质体进行脑靶向修饰；先用SATP试剂将Lf进行巯基化：将适量的Lf和SATP溶液混合，加入PBS缓冲溶液，搅拌反应30min；反应结束后以10K超滤管在转速为4000r/min条件下超滤4次；再将巯基化的Lf溶于去离子水配制成2.0mg/ml浓度的Lf溶液；37℃恒温磁力搅拌下，将Lf溶液按等体积缓慢加入PEG-TP纳米脂质体混悬液中，孵育4.0h，制得Lf-PEG-TP纳米脂质体。

2.如权利要求1所述的隐形化脑靶向雷公藤甲素纳米脂质体Lf-PEG-TP，其特征在于，所述隐形化雷公藤甲素纳米脂质体PEG-TP包封率的检测方法采用凝胶柱过滤法测定隐形化雷公藤甲素纳米脂质体PEG-TP的包封率，具体包括：预装柱：称取葡聚糖凝胶SephadexG-505g，加入蒸馏水100ml浸泡过夜，置90℃溶胀2h，室温过夜，使之完全溶胀；在不断搅拌下缓缓加入一根底部装有筛板1cm×25cm的玻璃层析柱，除尽气泡；加入50mlpH7.4的PBS平衡过夜，3倍～4倍柱体积的PBS冲洗备用；洗脱曲线的绘制：取制备好的隐形化雷公藤甲素脂质体lml上柱，用pH7.4的PBS洗脱，速率1ml/min；收集洗脱液，每管2ml，进液相测定，记录峰面积，计算浓度，绘制洗脱曲线；Sephadex G-50凝胶柱对游离药物回收率的分析：配制浓度0.20mg/ml的雷公藤甲素甲醇溶液，挥干甲醇；加入PBS溶液1ml，超声降低药物颗粒，并涡旋震荡促使其溶解；上柱，洗脱，收集游离药物，进液相测定，记录峰面积，计算柱回收率；

包封率的测定：取待测包封率的隐形化雷公藤甲素脂质体lml上柱，洗脱分离，过滤分离隐形化雷公藤甲素脂质体后，分管收集脂质体和游离药物，按下式计算包封率：

式中W_总表示脂质体混悬液中雷公藤甲素总量，W_游表示游离的雷公藤甲素量。

3.如权利要求1所述的隐形化脑靶向雷公藤甲素纳米脂质体Lf-PEG-TP，其特征在于，所述隐形化脑靶向雷公藤甲素纳米脂质体Lf-PEG-TP Lf偶联百分率的测定方法，其特征在于，所述Lf偶联百分率的测定方法包括：取制备的Lf-PEG-TP脂质体悬浮液，在10000rpm下离心30min，取上清，使用考马斯亮蓝法测定上清液游离蛋白含量，按下式计算脂质体中Lf偶联百分率：

式中W_总表示脂质体混悬液中Lf总量，W_游表示游离的Lf质量。