[发明专利]一种邻位连接技术用于定量检测H-FABP含量的试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种邻位连接技术用于定量检测H‑FABP含量的试剂盒。所述试剂盒包括：H‑FABP探针A、H‑FABP探针B、连接缓冲液、qPCR反应液；本发明还公开了所述的一种邻位连接技术用于定量检测H‑FABP含量试剂盒的制备方法，该方法包括：H‑FABP探针A的制备、H‑FABP探针B的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本明首次将邻位连接技术方法应用在H‑FABP的定量检测上，与现有技术方法相比，具有灵敏性高、特异性强、高通量等优点，可以提高急性冠脉综合症早期诊断的准确率，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种邻位连接技术用于体外免疫诊断检测人体内H-FABP的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

急性冠脉综合症(ACS)是冠心病中重要的急性事件之一，它分为急性心肌梗死(AMI)、不稳定心绞痛(UA)和心源性猝死(SCD)，心脏标志物在ACS的诊断及预后过程中，扮演重要的角色。由于ACS具有发病急，危害大的特点，因此选出特异性高的早期标志物，提早诊断，及时治疗对于ACS患者具有重要意义。

心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)，是心脏中富含的一种新型小分子蛋白，和两个脂肪酸分子结合并参与脂肪的代谢，为心肌细胞提供能量，它具有高度心脏特异性，在心脏中H-FABP浓度比骨骼肌中高2-10倍，当心肌细胞受损时可快速释放到血液中，作为标志物诊断早期AMI的敏感性为77.4％，特异性为89.4％，并且H-FABP浓度能够估测心肌的受损面积。因此H-FABP可作为早期诊断ACS的代表AMI的最佳检测指标，最早可在缺血性发作30min后检出，H-FABP浓度在大约6-8h后达到峰值，并且在大约24-30h内恢复至正常水平，依据H-FABP浓度高低可有效评估AMI、心衰及不稳定心绞痛风险，在临床上具有重要意义。除ACS之外，H-FABP还可以用于其他临床应用，例如肺栓塞(PE)、冠状动脉搭桥手术 (CABG)和脑血管疾病。

目前检测H-FABP含量的常用方法包括有免疫层析法和免疫比浊法等。这些方法均存在相应的缺点，免疫层析法的灵敏度低，试剂不稳定，重复性较差，难以进行定量；免疫比浊法存在液态的胶乳试剂稳定性不佳，检测结果精准性不佳。而本发明提出的基于一种邻位连接技术检测H-FABP含量的免疫诊断检测方法，具有检测灵敏度高、检测特异性强、样品损耗低、操作简单、检测设备常见等优势，将其应用于急性冠脉综合症的早期诊断，可以提高急性心肌梗死早期诊断的准确率，具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测H-FABP的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于邻位连接技术定量检测H-FABP含量的试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗H-FABP抗体偶联寡聚核苷酸的H-FABP探针A；

2)抗H-FABP抗体偶联寡聚核苷酸的H-FABP探针B；

在上述技术方案中，所述抗H-FABP抗体为针对H-FABP不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。

根据以上任一技术方案所述所制备的基于邻位连接技术的H-FABP检测试剂盒。其主要组成包括：

1)H-FABP探针A；

2)H-FABP探针B；

3)连接缓冲液；

4)qPCR反应液。

以上任一技术方案所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)将待测样本加入到反应孔中，再加入H-FABP探针A和H-FABP探针B，孵育5-30min后加入到连接缓冲液反应5-30min，最后与qPCR反应液进行混合；