[发明专利]一种基于树枝状高分子双重放大标记小分子竞争探针的制备及应用

权利要求书

1.一种基于树枝状高分子双重放大标记小分子竞争探针的制备及应用，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：取一定摩尔数的树枝状高分子，加入EDC进行活化，在碳酸盐缓冲液(pH 9.5)中，加入竞争小分子37℃搅拌反应1h，反应结束后按照摩尔比1∶10的比例加入购置的活化信号物质37℃搅拌反应1h，最后加入0.05mol/L Tris-HCl进行封闭反应30min，整个反应结束后，在PBS中透析去除未反应的小分子化学发光信号物质，收集透析后溶液，获得修饰化学发光信号物质-链霉亲和素-树枝状大分子复合物；

步骤二：取购置的活化生物素，按照摩尔比例1∶3的比例同竞争小分子进行混合反应，37℃反应1h，得生物素化待测物质探测分子备用；

步骤三：将步骤一制得的修饰信号物质-链霉亲和素-树枝状大分子符合物按照一定摩尔比加入到步骤二制得的生物素化竞争小分子中，继续反应37℃反应30min，转入偷袭袋中透析去除未反应的小分子及信号物质，即得所述双重放大竞争探针。

2.根据权利要求1所述的双重放大标记小分子竞争探针的制备方法，其特征在于，所述竞争性探针为抗原如T3、T4、T、E2、E3、P等，所用载体为树枝状高分子，所述信号物质为吖啶酯、三联吡啶钌、鲁米诺等化学发光物质。

3.根据权利要求1所述的双重放大标记小分子竞争探针的制备方法，其特征在于，步骤一中所述链霉亲和素、载体、信号物质的摩尔比为1∶3∶10。

4.根据权利要求1所述的双重放大标记小分子竞争探针的制备方法，其特征在于，步骤二中所述生物素化竞争小分子、生物素的摩尔比为1∶3。

5.根据权利要求1所述的双重放大标记小分子竞争探针的制备方法，其特征在于，步骤中所述标记碳酸盐溶液的质量浓度为0.05mol/L。

6.根据权利要求1至5任一项所述的双重放大标记小分子竞争探针的制备方法，其特征在于，步骤三中所述修饰信号物质和链霉亲和素的树枝状大分子、链亲和素、生物素化竞争免疫探针分子的摩尔比为3∶1∶1。

7.根据权利要求1所述的制得的双重放大标记小分子竞争探针制备用于化学发光检测试剂盒的方法，其特征在于，包括如下制备步骤：

步骤一，链霉亲和素磁珠的制备：取购买羧基磁性微球适量，加入EDC进行活化，用MES缓冲液溶解链霉亲和素，加入活化后的磁性微球，质量比为1∶2，37℃摇床反应3h，置于磁力分离架，Tris-HCl缓冲液清洗1次，加入10％BSA进行封闭，摇床反应30min后，置于磁性分离架Tris-HCl缓冲液清洗3次，加入含2％BSA的Tris-HCl缓冲液2℃～8℃保存；

步骤二，捕获探针的制备：取步骤一获得的链霉亲和素磁珠，加入生物素化的待测物质捕获探针分子37℃摇床反应30min，Tris-HCl缓冲液清洗三次，加入含2％BSA的Tris-HCl缓冲液，2℃～8℃保存，既得含有磁微粒的分离捕获探针复合体。

8.根据权利要求7所述的双重放大标记小分子竞争探针制备用于化学发光检测试剂盒的方法，其特征在于，步骤一中所述缓冲液为0.05mol/L Tris-HCl(pH7.4)，用所述缓冲液溶解的BSA浓度为2％。

9.权利要求1所述的双重放大标记小分子竞争探针在化学发光免疫检测中的应用。