[发明专利]一种鸭甲肝病毒抗原抗体复合物疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种鸭甲肝病毒抗原抗体复合物疫苗及其制备方法，所述疫苗为3型鸭甲肝病毒抗原与鸭卵黄抗体按照体积比1：50混合反应后的抗原抗体复合物，与现有技术相比，本发明通过在3型鸭甲肝病毒抗原中添加硫酸镁、氯化钠和蜂胶，并用该抗原免疫产蛋鸭制备鸭卵黄抗原，最后通过卵黄抗体和3型鸭甲肝病毒抗原进行合理配比，制成3型鸭甲肝病毒抗原抗体复合物疫苗，经过多次试验表明，该方法制备获得的抗原抗体复合物结合效率该疫苗注射后2h内起效，无免疫空白期，且效价高，安全性好，保护率高，保护周期长。

技术领域

本发明涉及的是禽用疫苗的技术领域，尤其涉及的是一种鸭甲肝病毒抗原抗体复合物疫苗及其制备方法。

背景技术

鸭甲型病毒性肝炎是由小RNA病毒科的鸭甲型肝炎病毒引起的一种急性、高度致死性传染病，目前是危害雏鸭的最主要疫病之一。鸭甲型病毒性肝炎分为三个血清型，即：DHAV-1、DHAV-2和DHAV-3。近几年，3型鸭甲肝病毒在临床上的分离率接近90％，为目前我国流行的主要血清型。

现有报道证实，鸭甲型病毒性肝炎可在2-39日龄鸭发病，目前该病主要采用疫苗或高免抗体进行预防。疫苗免疫预防存在免疫空白期，对较小日龄发病鸭群无法起到很好的保护，且保护率较低。高免抗体作用时间短，仅能持续7天左右，治疗时效果较好，但用其作为免疫预防的一种措施较为不妥。

抗原抗体复合物疫苗又称免疫复合物疫苗，是20世纪90年代发展起来的一种新型疫苗，由特异性高免血清按照恰当的比例与抗原混合而成，其优点在于安全性高和免疫效果好，可以突破母源抗体干扰，是目前为数不多的，可以在孵化期内接种的安全疫苗，因此在动物疫病防控中备受关注。抗原抗体复合物疫苗中的抗体主要作用是延缓病毒的释放，即当母源抗体水平降低到一定水平时，复合物中的抗体开始释放复制并产生免疫保护力，因此比普通疫苗的安全性和免疫效果更好。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种鸭甲肝病毒抗原抗体复合物疫苗的制备方法，以解决现有3型鸭甲型病毒性肝炎疫苗存在免疫空白期、保护周期短等技术问题。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种鸭甲肝病毒抗原抗体复合物疫苗，包括体积比为1：50的3型鸭甲肝病毒抗原与鸭卵黄抗体组成的抗原抗体复合物。

进一步地，所述3型鸭甲肝病毒抗原中含有0.4-0.5％质量比硫酸镁、0.1-0.25％质量比氯化钠和0.2-0.5％质量比蜂胶，效价范围为10^6.0ELD₅₀/0.2ml-10^7.0ELD₅₀/0.2ml，所述鸭卵黄抗体为经所述3型鸭甲肝病毒抗原免疫后的高免鸭蛋中提取获得的。

本发明还提供了一种鸭甲肝病毒抗原抗体复合物疫苗的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备3型鸭甲肝病毒抗原

利用3型鸭甲肝病毒免疫尿囊接种鸭胚，置于37℃下孵育，收集接种后24-96小时内死亡的鸭胚，置于-20℃冷冻处理0.5-1h，分别收取尿囊液和胚体；将胚体去掉头和四肢后，进行充分匀浆，离心取上清与尿囊液混合，经0.22微米滤膜进行过滤后，加入0.4-0.5％质量比硫酸镁、0.1-0.25％质量比氯化钠和0.2-0.5％质量比蜂胶，混匀，获得3型鸭甲肝病毒抗原；

(2)制备卵黄抗体

将步骤(1)制备的抗原灭活后免疫产蛋鸭，收集抗体效价为1：64以上的高免鸭蛋，在无菌条件下，取蛋黄与生理盐水按照1：5体积比混合，搅匀过滤后，向滤液中依次加入40％体积比的甲醛溶液、青霉素溶液、链霉素溶液，使其终体积浓度分别为0.1％(v/v)、2000-3000IU/mL、2000-3000IU/mL，混匀，置于37℃下反应1h，获得卵黄抗体；

(3)制备疫苗