[发明专利]一种阿司匹林的耐药性监测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种体内代谢产物的检测方法，特别涉及一种阿司匹林的耐药性监测方法。

背景技术

阿司匹林作为抗血小板药物广泛用于心脑血管疾病的一、二级预防，可明显减少各类栓塞和血栓形成事件，但仍有部分患者虽然长期服用常规剂量的阿司匹林（75-325mg）其血小板聚集能力扔未被很好抑制，称为生化阿司匹林抵抗，有的患者仍发生血栓栓塞事件，称为临床阿司匹林抵抗或阿司匹林治疗失败。随着抗血小板药物种类的增多和药物在患者身上生物学作用的不均一性，检测个体对抗血小板治疗的反应是非常有意义的，可以据此调节个体的用药类型和剂量达到最优化，来控制和减少发生血栓和出血的风险。

血栓烷A2（TXA2）是血小板内花生四烯酸代谢产生的一种具有强烈生物学活性的物质，是目前已知最强的缩血管物质和最强的血小板聚集剂之一，与血小板的活化密切相关，在血栓及血栓性疾病的病理生理过程中起重要作用。由于其在体内半衰期很短（约30s），故以往一般通过检测其在血浆中的稳定代谢产物TXB2的浓度间接得知TXA2的生成水平，从而了解体内血小板活化的程度。但因采血取样及实验操作过程中血小板体外活化也可产生TXB2，这就影响了实验结果的准确性，使得TXB2这一指标不能真实的反映体内血小板活化的水平。

近年，人们发现TXBZ的主要酶代谢产物11脱氢血栓烷B2（11- DH-TXB2）不在体外生成，催化TXB2转变为11-DH-TXB2的脱氢酶主要存在于肝、肺、肾，故11- DH-TXB2的体外浓度不受血小板体外活化的影响，且半衰期也较长（约46min），因此是反映体内血小板活化的一个新的强特异性敏感指标。由于11-DH-TXB2在尿液中的含量随饮水量及取样时间的不同变化较大，现在常用pg 11-DH-TXB2/mg 肌酐使尿液浓度标准化。

现在测定11-DH-TXB2含量的主要方法是试剂盒法，该方法步骤繁琐，从样品处理到得到数据至少需要几个小时，根据文献的报道，不同实验室测得数据差异性较大，数据差异能到两个数量级甚至三个数量级。因此试剂盒对操作人员、实验室条件等要求均较高，需要专业的生物学专业人员及酶标仪等设备。

发明内容

为弥补现有技术的不足，本发明提供一种快速、准确、能真实反映血小板活化程度的阿司匹林的耐药性监测方法，其目的是为患者提供阿司匹林的用药指导。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种阿司匹林的耐药性监测方法，其特殊之处在于：该方法通过检测尿液中11脱氢血栓烷B2含量实现，具体为：采用液相质谱法检测尿液样本，带入标准曲线分别得到尿液样本的11脱氢血栓烷B2浓度和肌酐浓度。

具体的，本发明的一种阿司匹林的耐药性监测方法，包括以下步骤：

（1）标准曲线溶液的制备

将11脱氢血栓烷B2溶液逐级稀释，稀释范围为10pg/ml-25ng/ml，向稀释后的各级11脱氢血栓烷B2溶液中加入内标液，混合均匀得11脱氢血栓烷B2标准曲线溶液；将肌酐溶液逐级稀释，稀释范围为1mg/dL-300mg/dL，向稀释后的各级肌酐溶液中加入内标液，混合均匀得肌酐标准曲线溶液；

（2）待测尿液样本的制备

将人体尿液样本处理后加入内标液，混合均匀；

（3）标准曲线的绘制

将步骤（1）获得的11脱氢血栓烷B2标准曲线溶液和肌酐标准曲线溶液进行液相质谱检测，线性回归分析，分别得到11脱氢血栓烷B2溶液标准曲线和肌酐溶液标准曲线；

（4）待测尿液样本检测

将步骤2得到的待测尿液样本进行液相质谱检测，带入步骤3得到的标准曲线中，分别得到尿液样本的11脱氢血栓烷B2浓度和肌酐浓度，按照11脱氢血栓烷B2值（pg/ml）/肌酐值（mg/dL）×100计算得报告值。

进一步的，本发明的一种阿司匹林的耐药性监测方法，所述内标液为11脱氢血栓烷B2氘代物（11- DH-TXB2-d₄）溶液。

进一步的，本发明的一种阿司匹林的耐药性监测方法，所述待测尿液样本的处理过程为：取人体尿液样本加入蛋白沉淀剂离心，取上清液过微孔滤膜。

进一步的，所述微孔滤膜孔径为0.22um。

进一步的，本发明的一种阿司匹林的耐药性监测方法，步骤（3）中以11脱氢血栓烷B2氘代物（11- DH-TXB2-d₄）作为内标溶液，以峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标进行线性回归分析。