[发明专利]一种固相萃取柱在他克莫司制剂杂质分析中的应用

说明书

本发明涉及一种固相萃取柱在他克莫司制剂软膏分析中的应用，在供试品制备过程中采用以二醇基硅烷键合硅胶为填料的固相萃取柱进行纯化，通过混悬、活化、上样、淋洗、洗脱等步骤对他克莫司软膏样品中的他克莫司及其相关物质进行有效分离，且节省有机溶剂、用时较短、专属性好，不存在辅料干扰他克莫司杂质检测，杂质回收率也符合要求，特别适用于从他克莫司软膏的复杂基质中有效分离他克莫司及其相关物质。

技术领域

本发明涉及药品分析领域，特别涉及一种固相萃取柱在他克莫司软膏杂质分析中的应用。

背景技术

他克莫司(Tacrolimus)又名FK506，是1985年从链霉菌属(streptomycestsukubaensis)中分离出的发酵产物，其化学结构属23元大环内酯类抗生素。由日本藤泽公司(现在的安斯泰来制药有限公司)研究开发，作为一种强力的新型免疫抑制剂，主要通过抑制白介素-2(L-2)的释放，全面抑制T淋巴细胞的作用，较环孢素(CsA)强100倍。近年来，作为肝、肾移植的一线用药，已在日本、美国等14个国家上市。临床实验表明，其在心、肝、肾、骨髓等移植中应用有很好的疗效。同时FK506在治疗特应性皮炎(AD)、系统性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性眼病等自身免疫性疾病中也发挥着积极的作用。

固相萃取柱(英文Solid Phase Extraction Column，简称SPE column，或SolidPhase extraction Cartridges，简称SPE cartridges)是从层析柱发展而来的一种用于萃取、分离、浓缩的样品前处理装置。主要应用于各种食品、农畜产品、环境样品以及生物样品中目标化合物的样品前处理。SPE技术基于液-固相色谱理论，采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、净化，是一种包括液相和固相物理萃取过程；也可以将其近似地看作一种简单的色谱过程。SPE是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分离原理。较常用的方法是使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，再选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱被测物质，从而达到快速分离净化与浓缩的目的。也可选择性吸附干扰杂质，而让被测物质流出；或同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。

他克莫司软膏的基质组成主要是石蜡、液状石蜡、白凡士林、蜂蜡等复杂混合物，采用常规的溶剂提取或萃取等方法无法将他克莫司及其相关物质有效分离出来，而对杂质的控制是药品研发领域一个非常重要的环节，直接关系到药品的稳定性、有效性及安全性，因此，开发一种有效的他克莫司软膏样品处理方法来控制药品质量显得尤为重要。本专利提供一种固相萃取柱在他克莫司软膏杂质分析中的应用，用于纯化他克司莫司软膏中的杂质，具有重复好、专属性好等优点，为制剂质量控制提供了保证。

发明内容

本发明的目的在于公开一种固相萃取柱在他克莫司制剂杂质分析中的应用，提供一种操作简便、重复性良好、专属性好的他克莫司软膏杂质纯化方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种他克莫司软膏评价方法，其特征在于包含以下步骤：

1)离心管和梨形瓶的预处理：用甲醇润洗离心管和梨形瓶，烘干备用；

2)样品的称量、混悬、萃取：称取他克莫司软膏置离心管中，加入正己烷：乙酸乙酯混合溶液或混合对照品溶液，剧烈振荡至混悬完全，离心，取上清液作为作为待净化液；

3)固相萃取柱的活化：先用乙腈润洗，再用正己烷：乙酸乙酯混合溶液冲洗；

4)上样：将步骤2)所得的净化液全部转移入固相萃取柱；

5)淋洗：用正己烷：乙酸乙酯混合溶液淋洗固相萃取柱；

6)洗脱：用乙酸乙酯、乙腈洗脱固相萃取柱，用梨形瓶收集洗脱液；