[发明专利]用于鉴定西藏米拉山地区大花红景天的特异引物及鉴定方法

说明书

本发明公开了一对用于西藏米拉山地区大花红景天鉴定的特异引物序列和鉴定方法，引物序列由5’TCCGTTGCTGAATGTCTGTC3’和5’ATCAAGCATGATTGTTGCGT3’组成。使用上述引物鉴定西藏米拉山地区大花红景天的方法包括4个步骤：（1）五种不同西藏海拔地区大花红景天基因组DNA提取；（2）特异引物对的PCR扩增；（3）PCR产物的凝胶电泳检测；（4）结果判读：依照标准DNA marker带在凝胶上的位置鉴定是否为西藏米拉山地区的大花红景天。采用上述方法鉴定的结果与种植区吻合率达95%以上。该方法在西藏米拉山地区大花红景天鉴定上具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术中的鉴定西藏米拉山地区大花红景天的引物序列及其利用该引物序列鉴定米拉山地区大花红景天的方法。

背景技术

大花红景天（Rhodiola crenuLata）是被子植物门（Angiospermae），双子叶植物纲（Dicotyledoneae），蔷薇目（Rosales），景天科(CrassuLaceae)红景天属(Rhodiola L.)植物。红景天是多年生的草本植物，一般生长在海拔为3500-5000m的高寒、低温、强紫外线的山区，国内外许多的药理研究表明，红景天在抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤、抗氧化、安眠镇静及生理调节等方面均具有独特的功效，被广泛的应用于保健品、药品、化妆品等领域。

红景天全世界大约有90种，主要的分布地带为北半球高寒的地带。能在特别恶劣的环境下生长，如强紫外线照射、低温干燥、昼夜温差大、极度缺氧等，大多为天然资源。在青藏地区的高寒山区，如西藏、新疆等地均有分布。西藏不同海拔地区大花红景天在外观差别不大，但在生化以及分子层面上有着很多差异。为了更准确简便的鉴定西藏米拉山地区的大花红景天，以SSR分子筛选作为基础，并根据其两端的序列来设计引物，在较高的退火温度下，进行特异性的扩增，从而实现由SSR分子标记到SCAR标记的转换，对西藏米拉山地区大花红景天的进行特异的检测。

西藏不同地区大花红景天的化学成分有着很大的差异，目前关于西藏不同地区大花红景天的研究大多基于分析某种化学成分的差异以及对于遗传多样性的考查，经过大量文献的阅读，并无发现有关西藏米拉山地区大花红景天检测的报道。

西藏米拉山地区大花红景天的鉴定填补了大花红景天不同海拔地区鉴定领域的空白。随着分子生物学技术的发展，特别是DNA分子标记技术的发展可以为这些研究提供准确、快捷的辅助手段。由于DNA分子标记不存在表达与否的问题，可以直接以DNA的形式表现，在植物体的各个组织、各发育时期均可检测，不受取材部位、时间、发育时期和环境的影响，信息量大，准确率高，为米拉山地区大花红景天品种的早期筛选带来广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的是筛选鉴定西藏不同海拔地区大花红景天的分子鉴定方法，克服以往形态识别的不足。提供快速筛选米拉山地区大花红景天的引物序列。

本发明的技术方案概述如下：

一种鉴定米拉山地区大花红景天的引物序列，它由引物序列：5’TCCGTTGCTGAATGTCTGTC3’和5’ATCAAGCATGATTGTTGCGT3’组成。其引物序列为：SEQ ID No1-2。

本发明进一步公开了使用特异引物序列鉴定西藏米拉山地区大花红景天品种的方法，它包括如下步骤：

（1）五种不同西藏海拔地区大花红景天基因组DNA提取；

（2）PCR扩增；在PCR专用薄壁离心管中加入：PCR缓冲溶液；10mmol/L dNTPs；10μmol/L上游引物序列：TCCGTTGCTGAATGTCTGTC ，以及10μmol/L下游引物序列：ATCAAGCATGATTGTTGCGT；大花红景天基因组DNA 50- 100ng；10mmol/L dNTPs；PCR缓冲溶液2.5微升；10μmol/LTaq聚合酶2单位；无菌水补至25微升；