[发明专利]钩吻中多种有效成分同时检测的液相色谱-串联质谱定量方法

说明书

本发明公开了钩吻中多种有效成分同时检测的液相色谱‑串联质谱定量方法，以钩吻素甲甲醇溶液、钩吻素子甲醇溶液、钩吻素己甲醇溶液和钩吻碱戊甲醇溶液为对照样本溶液，以钩吻提取液为待测样本溶液，采用高效液相色谱三重四级杆质谱仪检测，根据检测结果计算待测样本溶液中多种有效成分的含量。本发明的定量分析方法稳定可靠，简单高效，灵敏度与准确度高，具有广泛的实际应用性，能够应用于任何钩吻及其衍生产品的检测与定量分析。

技术领域

本发明涉及一种相对定量分析方法，尤其涉及同时检测钩吻中多种化合物的相对定量分析方法；属于中草药分析技术领域。

背景技术

钩吻为马钱科葫蔓藤植物的全草，钩吻中主要含有生物碱、环烯醚萜类、酚酸类、三萜类和油脂类等化学成分，迄今为止，国内外文献报道从钩吻植物中一共分离得到300余个化合物。钩吻具有抗肿瘤、抗炎和神经性疼痛和增强免疫等作用，主要用于治疗类风湿性关节炎疼痛、神经性疼痛、促进动物生长等。

目前，已报道从钩吻中分离得到120余个吲哚类生物碱，按其结构分为蛇根茎类(sarpagine)、钩吻素子类(koumine)、胡蔓藤乙素类(humantenine)、甲基钩吻素乙类(gelsedine)、钩吻素甲类(gelsemine)、育亨宾类(yohimbane)六大类。环烯醚萜类和酚酸类等非生物碱已分离得到100余种。

关于钩吻成分含量测定的文献报道主要有：李晶晶等采用酸性染料比色法测定钩吻及其制剂的总生物碱含量；粟建明等建立单一内标多控法同步测定钩吻中钩吻素甲和钩吻素子的含量(中药材，2013，36(10)：1626-1631)；利用HPLC法测定钩吻茎中胡蔓藤碱丙、钩吻素甲、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱和胡蔓藤碱乙的含量(药物分析杂志，2018，37(4)：595-501)；王毅等采用HPLC法，以钩吻素甲和钩吻素子作为对照品，对9批钩吻样品中化学成分进行指纹图谱研究，进行主成分和聚类分析，不同产地来源的钩吻其内在化学成分均有差异，呈现出不同的分类(刑事技术，2016，41(1)：50-53)。但由于钩吻中化学成分多，在液相上也出现了几个代表性的峰，因此，仅采用2-3个有标准品的化合物进行钩吻的质量控制存在局限性，需要用更多指标成分才能监测其质量控制。在无标准品情况下，如何进行钩吻多成分分析是制约该方法的关键技术问题。

钩吻由于其毒性的限制，在市场上并未作为任何一款产品的销售，但由于其促进动物生长的效果，在2015版中兽药典中收录，因此，在兽医的临床存在一定的广泛应用。目前，钩吻提取的方法有多种，如醇提、水提、酸提碱沉等，提取工艺各不相同，质量参差不齐，为了防止钩吻中毒等不良事件的发生，确保以钩吻为原料的相关成分的质量稳定可控，需要对钩吻中的有效成分进行多成分分析相对定量分析。

中国专利(ZL201510968 431)公开了一种快速检测与鉴定钩吻中化学成分的分析方法，并对化合物的成分进行了质谱裂解规律和结构分析(Fitoterapias，2017，121：94-105)。

发明内容

针对现有技术中在钩吻化合物成分检测的方法难以实现同时对钩吻化合物中多种成分同时作定量分析等技术问题，本发明的目的是在于提供一种同时检测钩吻中多种化合物的相对定量分析方法，该方法完善了钩吻质量评价体系，定量分析方法稳定可靠、灵敏准确、检测周期短，且样品前处理简单、可解决对照品数量不足的情况下对于钩吻的质量监控。

为了实现上述技术目的，本发明提供了一种钩吻中多种有效成分同时检测的液相色谱-串联质谱定量方法，其包括如下步骤：以钩吻素甲甲醇溶液、钩吻素子甲醇溶液、钩吻素己甲醇溶液和钩吻碱戊甲醇溶液为对照样本溶液，以钩吻提取液为待测样本溶液，采用高效液相色谱三重四级杆质谱仪检测，根据检测结果计算待测样本溶液中多种有效成分的含量。