[发明专利]钩吻中多种有效成分同时检测的液相色谱-串联质谱定量方法

权利要求书

1.钩吻中多种有效成分同时检测的液相色谱-串联质谱定量方法，其特征在于：以钩吻素甲甲醇溶液、钩吻素子甲醇溶液、钩吻素己甲醇溶液和钩吻碱戊甲醇溶液为对照样本溶液，以钩吻提取液为待测样本溶液，采用高效液相色谱三重四级杆质谱仪检测，根据检测结果计算待测样本溶液中多种有效成分的含量；

所述高效液相色谱条件为：

色谱柱为Waters C18色谱柱；

流动相A为4～6mM乙酸铵溶液，流动相B为乙腈，流速为0.2～0.4mL/min，柱温为25～35℃，进样量为5～15μL；

采用梯度洗脱程序：

0～2min内，流动相A和流动相B的体积比为90:10；

2～7min内，流动相A和流动相B的体积比由90:10匀速变至85:15；

7～20min内，流动相A和流动相B的体积比为85:15；

20～30min内，流动相A和流动相B的体积比由85:15匀速变至10:90；

30～33min内，流动相A和流动相B的体积比为10:90；

33～40min内，流动相A和B的体积比为90:10；

所述质谱条件为：离子源为ESI离子源，检测方式为正离子检测，扫描方式为多重反应监测，脱溶剂温度为330～340℃，毛细管电压为2500V～3500V，喷雾器压力为35～45Psi，去溶剂气体为N₂，N₂的流速为10～15L/min；

对不同浓度的钩吻素甲甲醇溶液、钩吻素子甲醇溶液、钩吻素己甲醇溶液和钩吻碱戊甲醇溶液为对照样本溶液进行检测，建立各对照样本溶液浓度与峰面积的关系，采用加权1/X²最小二乘法进行回归计算，求得线性回归方程与相关系数；再对待测样本溶液进行检测，并根据检测结果计算待测样本溶液中多种有效成分的含量；其中，X为对照样本溶液浓度，单位为μg/mL；

所述有效成分包括生物碱类、环烯醚萜类和酚酸类。

2.根据权利要求1所述的钩吻中多种有效成分同时检测的液相色谱-串联质谱定量方法，其特征在于：所述待测样本溶液的制备方法为：钩吻粉末采用质量百分比浓度为75～85％的乙醇在55～65℃温度下超声处理20～40min，过滤，收集滤液，重复上述操作一次，合并两次滤液，取1mL滤液采用氮吹后，加入同等体积初始流动相复溶，过0.22μm微孔滤膜，得到待测样本溶液。

3.根据权利要求2所述的钩吻中多种有效成分同时检测的液相色谱-串联质谱定量方法，其特征在于：所述钩吻粉末包括钩吻全草、根、茎、叶中至少一种粉末。

4.根据权利要求1所述的钩吻中多种有效成分同时检测的液相色谱-串联质谱定量方法，其特征在于：

色谱柱为C18色谱柱，口径4.6mm×柱长150mm，粒径5μm；

流动相A为5mM乙酸铵溶液，流动相B为乙腈，流速为0.3mL/min，柱温为20℃，进样量为5μL。

5.根据权利要求4所述的钩吻中多种有效成分同时检测的液相色谱-串联质谱定量方法，其特征在于：所述乙酸铵溶液的pH为5.2。

6.根据权利要求1所述的钩吻中多种有效成分同时检测的液相色谱-串联质谱定量方法，其特征在于：所述质谱条件为：离子源为ESI离子源，检测方式为正离子检测，扫描方式为多重反应监测，脱溶剂温度为335℃，毛细管电压为3000V，喷雾器压力为40Psi，去溶剂气体为N₂，N₂流速为12L/min。