[发明专利]从大米胚乳中提取的抗血栓肽

说明书

本发明公开了从大米胚乳中提取的抗血栓肽，制备方法包括稻谷预处理、蛋白的分解以及分离纯化。有益效果为：该抗血栓肽具有优良的抗血栓功效，制备方法无催化剂或酶的加入，避免了分离步骤；所用的提取液能够快速、便捷地提取到大米胚乳中的蛋白质，且目标蛋白的提取率高，杂蛋白的提取率小；分离纯化过程中所加入的二苯溴甲烷、3‑甲基水杨酸与乙醇具有协同作用，提高了旋蒸过程中抗血栓肽的收率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及从大米胚乳中提取的抗血栓肽。

背景技术

随着社会人口的老龄化和生活水平的不断提高，高血脂症、动脉粥样硬化及由之演变而来的心、脑血管血栓栓塞性疾病的发病率逐年增加。血栓性疾病是一种常见病，发病率约为千分之二，是由于血栓引起的血管腔狭窄与闭塞，使主要器官发生缺血和梗塞而引起机能障碍的各种疾病。其中血液凝固、血小板聚集、红细胞压积增高等，都是形成血栓的几种直接原因。这是一类严重影响健康的疾病，市场上对于预防和治疗血栓性疾病药物的需求量呈现出逐年增长的势头。 因此，治疗此类疾病的药品的研究开发就显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从大米胚乳中提取的抗血栓肽，该多肽能够有效抑制血小板的聚集，具有优良的抗血栓功效。

本发明的另一目的在于提供上述抗血栓肽的提取方法，提取过程中无催化剂或酶的加入，避免了分离过程中大米胚乳抗血栓肽的损失，大大提高了抗血栓肽的收率。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：从大米胚乳中提取的抗血栓肽，其制备方法包括以下步骤：

稻谷预处理：稻谷去壳、粉碎，向所得大米胚乳中加入提取液，置于漩涡混合器上震荡2-8min，接着在3000-4000r/min下离心15-25min，得上清液，预处理过程避免了杂质的影响，为后续的蛋白分解提供了良好的条件；

蛋白的分解：将所得上清液在绝对压力0.1-0.15MPa，温度116-122℃下蒸煮3.1-3.8h，得蛋白分解液，蛋白分解过程中无催化剂的加入，避免了后续催化剂的分离过程，简化了工艺步骤，且避免了分离过程中大米胚乳抗血栓肽的损失，降低了成本；

分离纯化：蛋白分解液经截留分子量为1kDa的超滤膜进行过滤，收集截留液，将截留液按照体积比加入到装有8-10倍D101大孔树脂的层析柱中，用3-5倍柱体积水洗脱除去杂质，然后用5-8倍柱体积的质量分数为58%-61%乙醇水溶液进行洗脱，乙醇洗脱液在50℃旋蒸除去乙醇、冷冻干燥得大米胚乳抗血栓肽。该过程操作简单，重复性好，且洗脱范围广，可根据实际情况进行放大条件实现工业化生产。

作为优选，稻谷预处理过程中大米胚乳与提取液的质量比为2-3.2/5，该提取液包含15-20mM醋酸钠、10-20mM磷酸盐缓冲液、8-14mM辛酸钠以及20-30mM硫酸铵。该条件下，所用的提取液能够快速、便捷地提取到大米胚乳中的蛋白质，且目标蛋白的提取率高，杂蛋白的提取率小。

作为优选，分离纯化过程中，在乙醇洗脱液旋蒸前向乙醇洗脱液中加入占乙醇洗脱液质量分数0.02％的二苯溴甲烷和0.03％的3-甲基水杨酸。所加入的二苯溴甲烷、3-甲基水杨酸与乙醇具有协同作用，提高了旋蒸过程中抗血栓肽的收率。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明公开的从大米胚乳中提取的抗血栓肽包括稻谷预处理、蛋白的分解以及分离纯化，该方法无催化剂或酶的加入，避免了分离步骤；所用的提取液能够快速、便捷地提取到大米胚乳中的蛋白质，且目标蛋白的提取率高，杂蛋白的提取率小；分离纯化过程中所加入的二苯溴甲烷、3-甲基水杨酸与乙醇具有协同作用，提高了旋蒸过程中抗血栓肽的收率。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步说明：

实施例1：