[发明专利]人脊髓性肌萎缩症致病基因拷贝数检测荧光定量PCR试剂盒

说明书

本发明公开了一种人脊髓性肌萎缩症致病基因拷贝数检测荧光定量PCR试剂盒，包括扩增引物和荧光探针，扩增引物为，一对特异性扩增SMN1和SMN2基因第7外显子的共用引物、一对特异性扩增SMN1和SMN2基因第8外显子的共用引物、一对特异性扩增内参基因CFTR基因的特异性引物；所述的荧光探针为，特异性检测SMN1基因第7外显子的荧光探针、特异性检测SMN1基因第8外显子的荧光探针、特异性检测SMN2基因第7外显子的荧光探针、特异性检测SMN2基因第8外显子的荧光探针、特异性检测内参基因CFTR基因的荧光探针。针对目前人运动神经元基因拷贝数定量检测方法存在的问题与不足，提供一种检测快速、简便，检测结果可靠的用于人脊髓性肌萎缩症致病基因拷贝数检测荧光定量PCR试剂盒。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体来说，涉及一种人脊髓性肌萎缩症致病基因拷贝数检测荧光定量PCR试剂盒。

背景技术

脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy，SMA)是一组较为常见的常染色体隐性遗传病，是由于脊髓前角细胞运动神经元退化变性所导致的神经肌肉疾病。临床表现为进行性、对称性肌无力、肌萎缩和瘫痪。新生儿发病率为1/6000～1/10000，在正常人群中致病基因携带者的发生率为1/40～1/80。SMA 为致死性疾病，神经肌肉疾病病情严重，目前临床上无有效治疗手段。脊髓性肌萎缩症国际协会根据SMA患者的发病年龄和临床表现分为4型：

Ⅰ型(又称Werding-Hoffman病)是最严重的亚型(重型)，约占SMA患者的一半，发病急、进展快，一般在出生6个月之内发病，表现为严重的全身肌无力和肌张力降低，不能独坐或走，多于2岁内死于呼吸肌麻痹；II型为慢性婴儿型(中间型)，出生后6～18个月间发病，患儿可独坐，但不能独立站立和行走，大多能存活2年以上；III型(又称Kugelberg-Welander病)为青少年型(轻型)，出生18个月后才发病，病情发展缓慢，多数仅表现有肌力弱，可以保持独立行走和站立的能力，一般在成年后死亡。Ⅳ型则为成年型(极轻型)，一般于20～30岁以后发病，主要表现为缓慢逐渐发生的上下肢近端无力和肌肉萎缩，成年期都能够行走。

研究发现，定位于染色体5q11.2～13.3区域的运动神经元存活基因 (survivalmotorneuron gene，SMN)是SMA发病的决定性基因。SMN基因全长20kb，含8个外显子，其转录产物约1700bp，编码294个氨基酸。该基因在5号染色体上有2种拷贝，在端粒侧的称为SMN1，在着丝粒侧的称SMN2，两者间具有高度的同源性，仅有5个碱基的差异分别位于第7、8外显子和第 6、7内含子中。SMA发病主要是由于SMN1基因发生缺失、点突变等基因异常所致。研究表明，SMN1基因是SMA的致病基因，大多数(90.0％以上) SMA患者有SMN1基因第7和(或)第8外显子的纯合缺失突变；而SMN2 基因是SMA症状轻重的调节基因，其拷贝数与SMA病情的严重程度有关，轻型SMA患者通常比重型SMA具有更多的SMN2拷贝数，即SMN2能在一定程度上弥补SMN1缺失所造成的功能缺陷。由于SMA属于染色体隐性遗传病，若夫妻皆为SMA致病基因携带者，则胎儿无论男女皆有1/4的概率为SMA 患者，1/2的概率为SMA致病基因携带者，另1/4的概率为正常。因此，筛查具有SMA家族病史者的SMA致病基因存在状态，对夫妻双方均为SMA致病基因携带者的胎儿进行产前诊断，对于预防SMA患儿出生、推进优生优育、提高人口素质具有重要意义。

临床上对SMA的辅助分子检测，目前常用的方法有聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法，即PCR-RFLP法。该方法利用SMN1基因和SMN2基因在第7和第8外显子上2个碱基差别区分SMN1和SMN2，检测SMN1外显子7，8的纯合缺失确定SMA诊断。但该方法无法对SMN1基因杂合缺失进行检测，不能区分SMA携带者和正常人及杂合缺失SMN1基因的SMA患者。