[发明专利]一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体是一种血管内表皮生长因子受体1的免疫磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

背景技术

可溶性血管内皮生长因子受体1 (soluble vascular endothelial growth factor receptor-1，sVEGFR-1)，也称可溶fms样酪氨酸激酶-1(sFlt-1)，sVEGFR-1缺乏VEGFR-1第七个免疫球蛋白样结构域，缺乏细胞内酪氨酸激酶结构域，故其没有细胞信号转导功能，但其仍有与血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PIGF)高亲和力结合的能力。sVEGFR-l在体内主要发挥着对抗 VEGF生物功能的作用，其主要表现在：（1）抗血管生成，抑制促血管生成的VEGF-VEGFR-2信号；（2）通过VEGR-1或VEGFR-2干扰VEGF介导的血管渗透性；（3）通过减弱VEGF-VEGFR-1依赖的单核细胞和巨噬细胞的活化和迁移产生抗炎作用。大量的研究也证实了VEGF的上述生物功能，如在人体内，sVEGFR-1被证明在维持角膜无血管方面发挥重要作用，在众多存在于角膜的抗血管生成的分子中 (血管抑素、内皮抑素等)，sVEGFR-1发挥着抑制VEGFR的促血管生成的作用 。

子痫前期是妊娠妇女特有且又常见的一种疾病，在初次妊娠的妇女中发病率为7％～10％，关于其发病机制目前较公认的学说可能与胎盘浅着床、胎盘灌注减少和滋养细胞缺血缺氧有关，是妊娠妇女，产妇和围生儿发病及死亡的主要原因。其病因学机制始终是产科领域的研究热点。近来的研究发现，子痫前期乃至子痫是由于滋养细胞对子宫螺旋动脉浸润过浅、胎盘血管网络形成不良及广泛的血管内皮损伤，导致胎盘缺血、缺氧而引发的，表明该病的发生与滋养细胞、内皮细胞的生长和功能有关，sFlt-l作为血管内皮生长因子(VEGF)和PLGF的直接抑制物，在子痫前期患者中水平升高导致胎盘滋养细胞及血管生长不良，进而导致内皮细胞损伤，并引发一系列的临床症状，目前子痫前期的早期预测抑或是早期发现、早期干预的临床诊治方面仍缺乏有效的预防和治疗手段，对于sFlt-1、PLGF与子痫前期的临床诊断的相关研究已经受到广泛关注。

到目前为止，用于血清中可溶性血管内皮生长因子受体1的方法主要有：酶联免疫法（ELISA）。酶联免疫吸附测定（ELISA）检测技术是利用抗原-抗体之间特异性的免疫反应识别生物液体中的靶分子，并利用酶-底物的显色反应定量的反应待测样本中靶分子的含量。该方法虽然检测价格低廉、快速，但灵敏度也不够，只适用于微量物质的检测和鉴定。因此，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测性激素结合球蛋白的方法具有十分重要的意义。

本发明采用方法为直接化学发光法，采用吖啶酯作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，可以完全捕捉反应产生的光子，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。本发明建立的磁微粒化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速、检测时间短、检测结果具有更高的准确性与重复性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度更高、反应时间短、操作简单、抗干扰性高的血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种血管内表皮生长因子受体1的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，本发明所提供的磁微粒化学发光方法检测血管内表皮生长因子受体1的试剂盒，采用磁微粒偶联血管内表皮生长因子受体1捕获抗体，吖啶酯标记血管内表皮生长因子受体1检测抗体。试剂盒还包括血管内表皮生长因子受体1校准品、上述吖啶酯作用的化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。

作为本发明进一步的方案，所述的磁微粒可直接与血管内表皮生长因子受体1捕获抗体偶联，也可将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记血管内表皮生长因子受体1捕获抗体。

作为本发明进一步的方案，所述磁微粒的表面修饰基团为一种或多种活性功能基团，包括但不限于羧基、氨基、对甲苯磺酰基或链霉亲和素-生物素。

作为本发明进一步的方案，所述的化学发光标记物为吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。

作为本发明进一步的方案，所述的吖啶酯标记的是血管内表皮生长因子受体1检测抗体。