[发明专利]基于氨刻蚀反应的尿素荧光测定方法

权利要求书

1.一种基于氨刻蚀反应的尿素荧光测定方法，其特征是利用脲酶特异性催化尿素生成氨和二氧化碳的体系，新生成的氨能够刻蚀铜纳米粒子生成铜纳米团簇荧光材料，从而表现出荧光发射光谱特征的变化，能直接用于尿素的含量检测；测定步骤如下：将脲酶溶液和尿素测定液按体积比为2：5混合，37°C反应30分钟后，加入氢氧化钠溶液和铜纳米粒子溶液，混合均匀后室温孵育15分钟，而后测定反应液在498 nm处的发射光强度值（F₄₉₈）以判断尿素的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种基于氨刻蚀反应的尿素荧光测定方法，其特征是所使用的脲酶浓度为2.5 U/mL，脲酶溶液和尿素测定液的总体积为1.05 mL；所使用的氢氧化钠浓度为30 mmol/L，体积为0.15 mL；所使用的铜纳米粒子溶液的体积为0.3 mL。

3.根据权利要求1所述的一种基于氨刻蚀反应的尿素荧光测定方法，其特征是所使用的铜纳米粒子溶液由以下方法制备：将1 mL浓度为0.1 mol/L的硝酸铜溶液在搅拌条件下逐滴加入到10 mL浓度为0.1 mol/L的抗坏血酸溶液中，室温搅拌反应1小时后再在室温条件下继续孵育12小时，即得到铜纳米粒子溶液。

4.根据权利要求1所述的一种基于氨刻蚀反应的尿素荧光测定方法，其特征是利用氨刻蚀产生的铜纳米团簇在498 nm处的发射光强度值（F₄₉₈）以判断尿素含量，所使用的激发波长为385 nm。

5.根据权利要求3或4所述的一种基于氨刻蚀反应的尿素荧光测定方法，其特征是将0.3 mL浓度为2.5 U/mL的脲酶溶液加入到0.75 mL含不同浓度尿素的磷酸盐缓冲液中，所述的磷酸盐缓冲液浓度为10 mmoL/L、pH=7.40，摇匀后37°C温浴30分钟，反应结束后，加入0.15 mL浓度为30 mmol/L的氢氧化钠和0.3 mL铜纳米粒子溶液，混合均匀后室温孵育15分钟，测定反应液在498 nm处的发射光强度值（F₄₉₈），在尿素浓度为0.25~5 mmol/L的范围内F₄₉₈与尿素浓度呈线性关系，检测限为0.01mmol/L。