[发明专利]CD20阳性疾病治疗的化合物及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一类能与人CD20结合的抗体、CD20抗原结合单元、 多肽和免疫偶联物等化合物。本发明也涉及将这些CD20结合分子用于 诊断和治疗诸如如恶性肿瘤的方法。

背景技术

CD20分子在B细胞及多数恶性B淋巴细胞表面存在，而在造血干 细胞、浆细胞和其他正常组织表面并不表达。CD20分子是治疗B细胞 淋巴瘤的理想靶标。抗CD20抗体主要有三种类型的功能活性：靶细胞 CD20结合导致生长抑制和(非经典的)细胞凋亡(指直接的细胞死亡)， 依赖补体的细胞毒性(CDC)，和依赖抗体细胞毒性(ADCC)，这种 细胞毒由细胞显现Fc受体(FcrR)所介导，比如表达FcrRIIIa的NK 细胞和巨噬细胞。

利妥昔单抗(Rituximab)，一种I型嵌合IgG1抗CD20抗体，大大 改进了B细胞恶性癌细胞的治疗与管理，增加了这些疾病患者的中位数 生存期。联合化疗，它能有效地提高扩散性大的B细胞淋巴瘤或滤泡性 淋巴瘤病人的反应率及无进展和总生存期。利妥昔单抗治疗同时也对服 从于B细胞清除治疗的其他疫病有利，包括B细胞慢性淋巴细胞白血 病(B-CLL)和风湿性关节炎。

然而，临床研究的证据表明，将利妥昔单抗“耐药”或“疗效变异”已 越来越普遍。为了使利妥昔单抗达到最佳疗效，需要了解影响利妥昔单 抗疗效的各种因素，大多数对利妥昔单抗反应不佳的患者不一定是“耐 药”，而是利妥昔单抗Fc杀伤功能没有达到与其癌细胞负担相适应的能 力，包括补体和ADCC效应功能。有学者对伴有利妥昔单抗疗效变异 患者在应用利妥昔单抗前输注新鲜血浆，提高补体浓度以提高疗效，可 使30％患者获益。然而，复发是一种普遍的事情，不能靠输血解决问 题。例如B-CLL，仍然需要一种延迟无毒性复发治疗。为了这个目的， 各种各样的冶疗方法正在被开发，包括新化疗，小分子，抗体结合药和 使用可选择的B细胞靶标。然而，许多这种药剂呈现了低安全性和耐受 性，或是需要使用其他更复杂的治疗方案。很明显，一种新型的高活性 的抗CD20药物，对治疗对利妥昔单抗有抵抗的血癌和相关的涉及 CD20表达的疾病，包括炎症疾病，很有必要。

通过工程化宿主细胞来改造单克隆抗体的寡糖组分增强其Fc介导 的效应的方法散见于不同的文献、专利报道。例如用β(1,4)-N-乙酰葡 糖胺转移酶III(GnTIII)过表达的CHO细胞制备的抗体表现出比亲本 细胞中表达的抗体更高的ADCC活性，而且活性的差异大约为10到20 倍，但GnTIII的过度表达对于CHO细胞有毒性并且由于是外源表达往 往随着培养过程中传代次数增加，GnTIII表达量会下降，用此作为宿主 细胞产生的抗体的岩藻糖含量会变化，从而影响抗体药物的均一性。产 生脱岩藻糖化抗体的细胞系的例子还包括蛋白质岩藻糖化缺陷的Lec13 CHO细胞(Ripka et al.Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)，但 由于其极低的蛋白产量不适合作为治疗性抗体生产的宿主细胞(Yutaka Kanda et al Biotechnol Bioeng.(2006)Jul 5；94(4):680-8)。α-1-6岩藻糖 基转移酶基因FUT8敲除的CHO细胞(Yamane-Ohnuki et al.(2004), Biotech.Bioeng.87:614)也导致生产的抗体岩藻糖含量降低。在如 Yamane-Ohnuki和Kyowa Hakko专利所述的FUT8敲除细胞系中，公开 了一种控制抗体岩藻糖化水平和提高ADCC效应的方法【18】，该方法 就是用特异的siRNA抑制宿主细胞中fut8基因的表达从而降低该宿主细 胞所生产抗体的岩藻糖水平，该方法与前述GnTIII过度表达的CHO细 胞系有一样的缺点，首先宿主细胞需要引入外源序列，其次siRNA抑制 目的基因的效率最多只能到70％左右，最后siRNA表达的稳定性可能影 响抗体药物的质量属性。