[发明专利]一种抗金黄色葡萄球菌α溶血素单克隆抗体及应用

说明书

本发明公开了一种抗金黄色葡萄球菌α溶血素单克隆抗体及应用。该单克隆抗体由重链和轻链组成；所述重链的可变区的氨基酸序列如序列表的序列2所示；所述轻链的可变区的氨基酸序列如序列表的序列4所示。本发明以α‑溶血素为靶抗原，从噬菌体抗体库中快速地筛选出全人源抗α‑溶血素的单克隆抗体。该单克隆抗体是一个全新的抗体，具有较高的亲和力和抑制α‑溶血素的溶血活性，并能提高感染金黄色葡萄球菌小鼠的生存率。本发明提供的单克隆抗体对于金黄色葡萄球菌的防控具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗金黄色葡萄球菌α溶血素单克隆抗体及应用，尤其涉及该单克隆抗体在制备用于预防和/或治疗金黄色葡萄球菌引起的疾病的药物中的应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)简称金葡菌，是一种自然界中分布广泛的革兰氏阳性致病菌。据估计有20-30％的人群都携带该病原菌，该菌主要存在于人体的粘膜、皮肤、特别是鼻咽部。金葡菌可以引发一系列的疾病，从轻微的皮肤感染，到烫伤样皮肤综合征，到脓肿，再到威胁生命的肺炎、脑膜炎、心内膜炎、骨髓炎、中毒性休克综合征等。金葡菌感染影响范围很广，可累及皮肤、软组织、呼吸道、骨髓、关节、血管等等。

金黄色葡萄球菌主要是通过分泌各种外毒素来引发机体感染，如α溶血素、β溶血素、γ溶血素和δ溶血素。其中α-溶血素(alpha hemolysin，Hla)是影响金葡菌致病性的最关键毒力因子之一，几乎对所有的哺乳动物细胞都具有毒性，可引发败血症、肺炎以及严重的皮肤感染等疾病。α-溶血素由293个氨基酸组成，分子量约为33kD，等电点为pH 8.5。该毒素属于穿孔毒素(pore forming cytotoxins，PFTs)家族的一员，常以水溶性单体形式分泌到细胞外，在宿主细胞膜上结合并寡聚化形成七聚体形式，从而形成孔道并裂解细胞。

目前,临床上主要使用抗生素来治疗金葡菌引起的感染。随着抗生素的大量使用，临床分离的金黄色葡萄球菌大都对一种或多种抗生素敏感性降低。MRSA(超级细菌)出现后，抗生素治疗受到了很大的挑战。面对日益严峻的金葡菌耐药性,人们开始思考新的抗感染策略,如通过使用抗体中和金葡菌菌分泌的外毒素而非直接杀死金葡菌来达到治疗的效果。α-溶血素作为金葡菌致病性的关键毒力因子，成为抗体药物研发的重要靶标。目前针对金黄色葡萄球菌感染的在研单抗有MEDI4893、KBSA-301、514G3和ASN200等。

全人源抗体是治疗性抗体发展的主要方向，噬菌体抗体库技术的出现为全人源抗体的制备提供了良好的技术平台。噬菌体抗体库技术采用PCR方法体外扩增人抗体VH和VL部分基因，然后将VH和VL随机重组克隆至噬菌体展示载体上。呈现在噬菌体表面的抗体能够在体外与固相化的靶向抗原相互作用，通过反复洗涤去除非特异性结合抗体，然后洗脱并收集与抗原结合的噬菌体，该噬菌体再次感染大肠杆菌，使特异性的噬菌体得到富集。最后通过DNA测序工作，获得与靶向抗原特异性结合的抗体序列。噬菌体抗体库技术模拟了体内免疫系统的选择作用和抗体亲和力成熟的过程，无需经过杂交瘤技术，甚至无需经过免疫过程即可获得特异性的和高亲和力的各种抗体分子片段，大大缩短了抗体的研发时间。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种抗金黄色葡萄球菌α溶血素单克隆抗体。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种单克隆抗体，为一种IgG抗体，其可由重链和轻链组成；所述重链可变区的氨基酸序列可如序列表的序列2所示；所述轻链可变区的氨基酸序列可如序列表的序列4所示。所述IgG抗体可为抗金黄色葡萄球菌α溶血素的单克隆抗体。

编码所述IgG抗体的核酸分子也属于本发明的保护范围。

编码所述IgG抗体的核酸分子可由编码所述重链可变区的核酸分子和编码所述轻链可变区的核酸分子组成。

编码所述重链可变区的核酸分子可为序列表的序列1所示的DNA分子。