[发明专利]一种扩宽免疫胶体金检测范围的方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外免疫检测技术领域，尤其是一种扩宽免疫胶体金检测范围的方法。

背景技术

胶体金是由氯金酸在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。

在免疫胶体金定量试验中，检测范围受抗体(或抗原)性质和抗体(或抗原)使用量的影响。在免疫胶体金检测中高浓度样本会产生钩状效应，对试剂的检测范围都有局限性，不能满足临床样本对试剂的需要。钩状效应即HOOK效应,是指由于抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象，其中抗体过量叫做前带效应；抗原过量叫做后带效应。抗原抗体特异性反应时，生成结合物的量与反应物的浓度有关。例如，当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。

消除免疫胶体金检测中钩状效应的方法有稀释法即同时检测稀释前和稀释后的待测样本，若稀释后的浓度值乘以相应稀释倍数所得的浓度值远远大于稀释前的浓度值，则该样本出现钩状效应，最终浓度值需要多次稀释后取其最大浓度值；反之稀释前的浓度值则为最终浓度值。专利CN105044332A能监测高浓度样本在免疫胶体金试验中是否存在HOOK效应，若不存在HOOK效应则直接显示结果，若出现HOOK效应则需要稀释高浓度样本后重新测试。

稀释法能消除免疫胶体金检测中钩状效应的方法，但其无法通过一次检测就判断出检测样本是否存在钩状效应，需要至少两次检测，操作复杂，检测次数增加，造成了检测试剂的极大浪费和增加了检测人员的操作误差，给检测结果的准确性带来了隐患，同时稀释后的样本其检测结果的准确性有待验证。专利CN105044332A虽然能通过一次检测就能判断出检测样本是否存在钩状效应，但出现钩状效应的样本，还是需要至少两次检测，操作复杂，检测次数增加，造成了检测试剂的极大浪费和增加了检测人员的操作误差，给检测结果的准确性带来了隐患，同时稀释后的样本其检测结果的准确性有待验证。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种扩宽免疫胶体金检测范围的方法，该方法可扩宽免疫胶体金检测范围，判断免疫胶体金检测中检测样本是否存在钩状效应，又能无需二次检测，直接对存在钩状效应的样本进行判读检测。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种扩宽免疫胶体金检测范围的方法，分别在t_0.5和t时间时使用免疫层析判读记录仪测定胶体金测试条的反应线(T线)的信号值GOD_0.5和GOD值，t表示完全反应的时间，t_0.5表示完全反应时信号值一半的时间，当GOD/GOD_0.5>1.5时判定为未出现钩状效应，按直线回归方程对检测结果的信号值进行浓度值计算，当GOD/GOD_0.5<1.5时判定为出现钩状效应，按照logistic曲线拟合四参数法方程对检测结果的信号值进行浓度值的计算。

优选的，上述扩宽免疫胶体金检测范围的方法中使用的免疫层析判读记录仪为中新科炬生物制药股份有限公司生产的编号为NS3001和NS7001的免疫层析判读记录仪。

上述扩宽免疫胶体金检测范围的方法中所述时间t和t0.5是通过如下方法确定的：取一已知低浓度的阳性样本(未发生钩状效应的样本)，使用免疫层析判读记录仪连续监测该阳性样本的胶体金测试条的反应线的信号值随时间变化，待反应线信号值不再随时间的变化而变化时，即确定出完全反应的时间t，t0.5为完全反应时信号值一半的时间。

所述判定是否发生钩状效应的方法，使用免疫层析判读记录仪连续监测已知浓度的阳性样本的胶体金测试条的反应线的信号值随时间的变化发现未发生钩状效应的样本，反应线的信号值会随着时间的增加而缓慢增加，不会在短时间内达到峰值，故GOD/GOD0.5>1.5，而发生钩状效应的样本，反应线的信号值会随着时间的增加而迅速增加，会在短时间内达到峰值，故GOD/GOD0.5<1.5。

优选的，上述扩宽免疫胶体金检测范围的方法，免疫胶体金未发生钩状效应的区域和发生钩状效应的区域的标准曲线通过以下方法确定的：