[发明专利]一种鲫鱼冠状病毒HB93的数字RT-PCR检测引物及应用

说明书

本发明提供了一种鲫鱼冠状病毒HB93的数字RT‑PCR检测引物及应用，所述方法包括利用CCBV基因片段设计的引物序列和探针序列进行数字PCR扩增反应。利用本发明所提供的数字PCR检测引物可以实现对鲫鱼冠状病毒样品的精准检测，灵敏度可以达到2个拷贝。此外，该方法步骤简便易于操作，因此在实际应用中具有很大的灵活性，是一种检测鲫鱼冠状病毒的有效方法。

技术领域

本发明属于病毒分子检测技术领域，具体涉及一种鲫鱼冠状病毒HB93的数字RT-PCR检测引物及应用。

背景技术

国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)于2012年发表了最新的病毒分类第九次报告，将套式病毒目(Nidovirales)中的冠状病毒科(Coronaviridea)中新设冠状病毒亚科(Coronavirinea)和环曲病毒亚科(Torovirinae)。

冠状病毒科是一类线形单股正链RNA病毒，最早于1937年从鸡身上分离出来，Almeida等对这些病毒进行了形态学研究，电子显微镜观察发现这些病毒的包膜上有形似日冕的棘突，故提出命名这类病毒为冠状病毒[1]。1975年，国际病毒命名和分类委员会正式命名了冠状病毒科。2002-2003年期间，自我国局部地区发生的非典型肺炎，即由冠状病毒属的严重急性呼吸综合征病毒(SARS-CoV)引起，世界上有30多个国家和地区相继报道出现病例，病死率超过10％。2012年，中东地区开始出现新型冠状病毒，病死率超过50％，引起了世界范围的广泛关注，造成社会对冠状病毒的恐慌。因此，对冠状病毒进行深入研究具有重要意义。

目前对冠状病毒科的研究主要集中在冠状病毒亚科，而对环曲病毒亚科研究甚少。其中，2006年鳊鱼病毒属(Bafinivirus)的中的鳊鱼病毒(White bream virus)由Schütze H等科学家在鳊鱼体内发现，这也是目前ICTV分类中确定的唯一以水生动物为宿主的冠状病毒。

目前鲫鱼冠状病毒(CrucianCarpBafinivirus,CCBV)尚无公开报道，更也无有效的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种鲫鱼冠状病毒HB93的数字RT-PCR检测引物，所述的引物如下：

F：5'-CTATGGAATGGAAGAAACACGAC-3'

R：5'-GAGAGTTGATGTCATAGCTACAAG-3'

P：5'-FAM-CTGGGACAACACCAAAACCACCTAAG-TAMRA-3'。

本发明的另一个目的在于提供了一种鲫鱼冠状病毒HB93的数字RT-PCR检测引物的应用。所述的引物可用于制备检测鲫鱼冠状病毒的检测试剂盒。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种鲫鱼冠状病毒HB93的数字RT-PCR检测引物，所述的引物如下：

F：5'-CTATGGAATGGAAGAAACACGAC-3'

R：5'-GAGAGTTGATGTCATAGCTACAAG-3'

P：5'-FAM-CTGGGACAACACCAAAACCACCTAAG-TAMRA-3'。

一种鲫鱼冠状病毒HB93的数字RT-PCR检测引物的应用，包括利用上述引物制备检测鲫鱼冠状病毒的检测试剂盒。

优选的，当制备成试剂盒时，该试剂盒的非诊断性检测方法包括：

一种鲫鱼冠状病毒HB93的数字RT-PCR检测方法，步骤包括：