[发明专利]一种检测呋喃妥因代谢物量子点免疫层析试纸、制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，具体涉及一种检测呋喃妥因代谢物量子点免疫层析试纸、制备方法及其应用。

技术背景

呋喃妥因(Nitrofurantion)，属于硝基呋喃类抗生素，是一种广谱性抗生素，具有很好的抗菌作用和药动力的特性，药物对大多数革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌和原虫等病原体均有杀灭作用，因价格较低且效果好，曾经在水产养殖业中广泛使用。但长期研究证明，硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变、基因突变和有致畸胎副作用，多国已禁止了此类药物在治疗和饲料中的使用。1995年欧盟全面规定禁止使用硝基呋喃类抗菌药物，在动物源性食品中硝基呋喃类药物及代谢物残留的限值为不得检出。2002年美国全面禁止将硝基呋喃类药物用于食源性动物。2004年美国食品和药物管理局(FDA)公布了禁止在进口动物源性食品中使用的11种药物名单，其中包括呋喃西林和呋喃唑酮。我国农业部于2002年4 月发布193号公告，公布了《食品动物禁用兽药及其他化合物清单》，规定在所有食品动物中禁止使用硝基呋喃类抗生素，2003年又将水产品硝基呋喃类代谢物纳入残留监控计划。

目前用来检测呋喃妥因代谢物的最常用方法是高效液相色谱法(HPLC)、液质联用法 (LC-MS、LC-MS/MS)和酶联免疫法等。LC-MS、LC-MS/MS和HPLC具有高灵敏度高特异性的特点，但样品前处理繁琐、试剂消耗量大、检测时间长、设备昂贵、需专业技术人员进行操作、不适合进行现场快速检测和大量样品的筛选，难以满足大量样本的筛查的需要。酶联免疫分析法虽然灵敏度高，特异性强，但需要酶标仪等仪器设备，检测时间长，并且要求本领域专业技术人员来操作。这些方法难以实现大批量样品的快速检测与现场检测。

量子点(Quantum dots，QDs)，又称为半导体纳米晶，是一种在光源激发下发射出明亮荧光的半导体纳米晶粒，主要由Ⅱ～Ⅵ族或者Ⅲ～Ⅴ族元素组成，如碲化镉(CdTe)、硒化镉(CdSe) 等。与传统荧光材料相比，QDs的优点有：具有量子效应和良好的发光性；具有较宽的激发波长和较窄的发射波长；稳定性好；具有良好的生物兼容性；荧光寿命较长。由于量子点具有以上优良特性，使其可能成为分子检测和医学诊断的有力工具，经过近20多年的发展，逐步从细胞、组织标记成像、细胞示踪、活体成像等应用研究开始向临床检测、疾病控制、食品安全检测等领域方向发展。

量子点标记免疫层析技术在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，利用荧光量子点作标记物，将量子点与抗体通过化学反应(COOH与NH₂)偶联在一起，当抗体与抗原特异性结合时，量子点就标记于待测抗原上，在紫外灯的照射下呈现不同的荧光强度。其中，控制线(C线)颜色的有无决定着试纸条的有效性，而检测线(T线)的有无则表示着目标物的有无。除了具备酶联免疫法的诸多优点外，还克服了酶联免疫法的一些不足。该技术操作简单快速，反应通常只需数分钟至数十分钟，检测结果以肉眼可见的显色条带来判读，安全无污染，具有广泛的应用前景。

发明内容

本发明针对现有技术的不足和缺陷，利用量子点多波长激发、高强度荧光发射、发射峰窄、峰形对称、发光稳定性好的荧光特性，提供一种新型的检测呋喃妥因代谢物的量子点免疫层析试纸条的制备方法及其应用，根据量子点的荧光性质和呋喃妥因代谢物浓度之间的关系，在试纸条上检测代谢物，实现量子点试纸条检测代谢物的定量检测，以解决现有技术灵敏度低，操作复杂，设备要求高等问题。

本发明提供了一种检测呋喃妥因代谢物量子点免疫层析试纸，所述试纸由样品垫、微孔纤维膜、反应膜、吸水垫依次粘贴在支持板上组成，所述微孔纤维膜上具有呋喃妥因代谢物特异性抗体-量子点探针。

所述呋喃妥因代谢物特异性抗体-量子点探针中的呋喃妥因代谢物特异性抗体是以呋喃妥因代谢物半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述呋喃妥因代谢物特异性抗体为呋喃妥因代谢物特异性单克隆抗体。

所述反应膜上设置有由呋喃妥因代谢物半抗原-载体蛋白偶联物包被制成的检测线和由兔抗鼠抗抗体包被制成的控制线。

一种检测呋喃妥因代谢物量子点免疫层析试纸的制备方法，包括以下步骤：

1)将制备的呋喃妥因代谢物特异性抗体加入到制备的量子点中，得到呋喃妥因代谢物特异性抗体-量子点探针；将呋喃妥因代谢物特异性抗体-量子点探针均匀喷覆于微孔玻璃纤维膜表面得到微孔纤维膜；