[发明专利]用于基因分型检测东南亚缺失型α地中海贫血的方法及试剂盒

说明书

本发明提供一种用于基因分型检测东南亚缺失型α地中海贫血的引物组及试剂盒，属于分子生物学领域。所述引物组包括如下引物对：上下游引物序列分别如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.1所示的APF/APR；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的SEAF/SEAR。本发明还提供基于所述引物组的试剂盒。本发明的引物组和试剂盒具有快速、灵敏、安全等优点，可应用于‑‑^SEA缺失型地中海贫血的检测。

技术领域

本发明属于分子生物学医药领域，具体涉及一种检测东南亚缺失型α地中海贫血技术，特别是涉及一种单管直接PCR检测东南亚缺失型α地中海贫血的试剂盒。

背景技术

地中海贫血(thalassemia,简称地贫)是由于珠蛋白基因发生缺陷；致使珠蛋白链合成减少或缺失,使形成血红蛋白的α-链/非α-链比例失衡,而导致的一组严重威胁人类健康的致残、致死的遗传溶血蛋白病，也是世界上最常见的单基因遗传病之一。保守估计全世界地中海贫血基因携带者近2亿人,主要发生在地中海沿岸国家、非洲、东南亚和我国南方地区,其中包括我国南方广西、广东、海南等省份。

地中海贫血主要包括α-地中海贫血(以下简称α-地贫)和β-地中海贫血。α-珠蛋白基因位于人类基因组第16号染色体短臂末端α-珠蛋白基因簇中(16p13.3)。该基因簇包括二个α基因(α1和α2)、一个胚胎期α类基因(ζ2),三个假基因(ψζ1,ψα2,ψα1)和一个功能未明的基因(θ1)，其序列顺序为:5'-ζ2-ψζ1-ψα2-ψα1-α2-α1-θl-3'，全长约50kb。α-地贫属于常染色体隐性遗传病,其分子基础是位于16号染色体末端16p13.3位点上的人α-珠蛋白基因簇的先天性遗传缺陷。α-地贫基因突变主要是片段缺失和点突变，而在广西、广东,α-地中海贫血基因的人群携带率分别高达17.55％与8.53％；研究资料表明95％以上的α-地贫是由于α-珠蛋白基因大片断缺失(缺失型)所致,其缺失数目是α-地中海贫血临床表现及分型的依据。

目前已鉴定的α-地贫缺失类型至少有36种，其中中国人占8种。在我国最常见的三种α-地贫缺失基因型为--^SEA/αα(东南亚型)、-α^4.2/αα(左缺失型)与-α^3.7/αα(右缺失型),累计占α-地贫的85％以上。--^SEA自身或与--a^3.7或--a^4.2相互共同遗传可引起致死性的HbBart's胎儿(--^SEA/--^SEA)或严重影响生命质量的HbH病(--^SEA/-α^3.7和--^SEA/-α^4.2)。东南亚型(--^SEA)的纯合子(--^SEA/--^SEA)，由于其4个α珠蛋白基因均缺失或缺陷，以致完全无α链生成，是α-地贫中最为严重的一种，即重型α地贫。患者在胎儿期即发生大量γ链合成γ4(HbBart′s)，Hb Bart′s对氧的亲合力极高，造成组织缺氧而引起胎儿水肿综合征，胎儿常于30～40周时流产、死胎或娩出后半小时内死亡。目前该病尚无理想的治疗方法，研究表明在地贫高发区，对夫妇双方均为地贫基因携带者的孕妇在妊娠早期筛查或中期应用相应分析技术通过遗传筛查和产前基因诊断选择性地淘汰重症α-地贫胎儿则是控制该病发生的首要途径和有效预防措施。因此，对于东南亚缺失型α地中海贫血的检测急需一种简单、能快速准确基因分型的技术手段。

目前已报道α-地贫传统的筛查方法如血常规参数检测分析、红细胞渗透脆性试验、血红蛋白电泳试验等特异性不高，较易产生假阴性。对于α-地中海贫血的分子诊断,SouthernBlot杂交技术是金标准,准确性高,但操作繁琐、标本用量大、费时费力、检测通量小而不适合常规检测；其他TaqMan探针技术、变性高效液相色谱(DHPLC)、DNA直接测序和DNA微阵列技术等。但这些方法检测过程繁琐、检测所用时间长、使用试剂或者仪器昂贵和特殊的标记引物等，因而不利于临床广泛的推广应用。