[发明专利]用于基因分型检测3种缺失型α地中海贫血的引物组及试剂盒

说明书

本发明提供一种用于基因分型检测3种缺失型α地中海贫血的引物组及试剂盒，属于分子生物学检测领域。所述引物组包括如下引物对：上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的APF/APR；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的SEAF/SEAR；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的4.2F/4.2R；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.7所示的3.7F/3.7R。本发明还提供基于所述引物组的试剂盒。本发明的引物组和试剂盒可应用于常见缺失型地中海贫血的检测，具有快速、灵敏、安全等优点。

技术领域

本发明属于分子生物学医药领域，具体涉及一种用于基因分型检测3种缺失型α地中海贫血的引物组及试剂盒。

背景技术

地中海贫血(thalassemia,简称地贫)，又称“珠蛋白合成障碍性贫血”等，是一种隐性基因遗传病，可导致遗传性溶血性贫血，其分子病理学基础主要是由于珠蛋白基因的缺陷(基因突变或缺失)导致一种或几种珠蛋白肤链合成障碍，而引起血红蛋白的α-链/非α-链比例失衡，进而导致血红蛋白不稳定，冗余的珠蛋白链沉积在红细胞膜上，红细胞膜的通透性和脆性发生改变，导致溶血性贫血，临床上表现出症状轻重不一的慢性进行性溶血性贫血。并且根据受累的珠蛋白肽链的类型分为α、β、γ、δ和δβ地贫等类型。其中以α、β地贫最为常见，危害也最大。广泛发生于热带和亚热带国家，我国长江以南发病率高，无明显症状的携带者超过人群20％。

临床上，将α链合成减少而β链相对过剩则归类为α-地贫，是由于α珠蛋白基因缺失或缺陷导致α珠蛋白肽链合成障碍所致。珠蛋白基因位于α珠蛋白基因簇，该基因簇的染色体定位为16p13.3，正常人每条16号染色体上有2个α珠蛋白基因。α地贫可以分为缺失型和非缺失型两大基因类型.95％以上为缺失型，是由于α珠蛋白基因大片段缺失所致。地贫具高度的遗传异质性。一条染色体上缺失或缺陷1个α基因，为α⁺地贫，表现为α-珠蛋白肤链合成部分受阻，通常缺失一个α基因或一个α基因发生点突变或少数几个碱基的缺失或插入引起(-α/αα，αα/α^Tα)，我国最常见的α⁺地贫基因为-α^3.7、-α^4.2缺失型突变以及Hb WS,Hb QS与Hb CS等点突变。缺失2个α基因，为α⁰地贫，特点为α-珠蛋白肤链合成完全受阻，,我国最常见的为--^SEA，少见--^THAI，而--^FIL则更罕见。α⁺地贫或α⁰地贫携带者存在着下一代出现血红蛋白H病(Hb H)(--/-α或--/α^Tα)或重型的Hb Bart's水肿综合症胎儿的风险。Hb H基因型与该病临床症状严重程度相关，可以是轻度贫血，也可以是重度贫血。最常见的是α⁰-地贫复合α⁺地贫的缺失型Hb H病，然而非缺失型的Hb H病也占有相当的比例,这类病人比那些缺了3个α珠蛋白基因所表现出来的临床症状更严重，贫血更严重。

α地贫目前该病尚无理想的治疗方法，研究表明在地贫高发区，对夫妇双方均为地贫基因携带者的孕妇在妊娠早期筛查或中期应用相应分析技术通过遗传筛查和产前基因诊断选择性地淘汰重症α-地贫胎儿则是控制该病发生的首要途径和有效预防措施。因此，对于缺失型α-地贫的检测急需一种简单、能快速准确基因分型的技术手段。

目前对α-地贫筛查方法如血常规参数检测分析、红细胞渗透脆性试验、血红蛋白电泳试验等特异性不高，较易产生假阴性。对于α-地中海贫血的分子诊断,Southern Blot杂交技术是金标准,准确性高,但操作繁琐、标本用量大、费时费力、检测通量小而不适合常规检测；其他TaqMan探针技术、变性高效液相色谱(DHPLC)、DNA直接测序和DNA微阵列技术等。但这些方法检测过程繁琐、检测所用时间长、使用试剂或者仪器昂贵和特殊的标记引物等，因而不利于临床广泛的推广应用。