[发明专利]转基因棉花MON88701品系特异性实时荧光PCR检测引物、探针、方法和试剂盒

说明书

技术领域：

本发明属于转基因产品检测领域，具体涉及转基因棉花MON88701品系特异性实时荧光 PCR检测引物、探针、方法和试剂盒。

背景技术：

转基因棉花MON88701是孟山都公司开发的耐受两种广谱除草剂麦草畏和草铵膦的转基因品系。MON88701经由农杆菌介导PV-GHHT6997质粒转入Coker 130棉花而成，其T-DNA 含有dmo(dicamba mono-oxygenase)基因盒和bar(phosphinothricin N-acetyltransferase，PAT) 基因盒，分别编码麦草畏单加氧酶和膦丝菌素N-乙酰转移酶(PAT)，它们在转基因植株内均为1个拷贝。

目前对转基因产品多数国家均采用相应的标识管理制度，品系特异性PCR(转化事件特异性)(Event-specific PCR)检测的目标序列是外源插入序列与植物基因组间连接区，相较于筛选PCR(Screening PCR)、基因特异性PCR(Gene-specific PCR)、构建特异性PCR (Construct-specific PCR)具有更加高的具有高特异性，能用于检测鉴定相同质粒转化的转基因具体品系，是目前转基因品系鉴定检测技术研究和实际检测工作中的重要方法。

为打破其他国家和地区设置的转基因产品贸易技术壁垒，完善和我国转基因产品定量检测技术体系，保护消费者对转基因产品的知情权和选择权，为进出境口岸监管部门提供转基因不同品系标识检测鉴定的方法，建立转基因棉花MON88701品系特异性定量PCR精准检测方法十分必要。

发明内容：

本发明的目的是提供一种特异性好、灵敏度高、稳定性强，快速准确鉴别转基因棉花 MON88701品系的转基因棉花MON88701品系特异性实时荧光PCR检测引物、探针、方法和试剂盒。

本发明的第一个目的是提供一种转基因棉花MON88701品系特异性实时荧光PCR检测引物，其特征在于，所述的检测引物如下所示：

MON88701-F：5’-GAAATGCAGAGTTACAAGAACATCC-3’(如SEQ ID NO.1所示)；

MON88701-R：5’-TGACGAATTCTGCAGAAGCTTG-3’(如SEQ ID NO.2所示)。

本发明的第二个目的是提供一种转基因棉花MON88701品系特异性实时荧光PCR检测探针，其特征在于，所述的检测探针如下所示：

MON88701-P：5’-CCAAAGCCCGGGCTTAATTAAGGC-3’(如SEQ ID NO.3所示)，探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

所述的荧光报告基团优选为FAM，所述的荧光淬灭基团优选为BHQ1。

本发明的第三个目的是提供一种转基因棉花MON88701品系特异性实时荧光PCR检测试剂盒，包括实时荧光定量PCR反应液、耐热DNA聚合酶、检测引物和检测探针，其特征在于，所述的检测引物如下所示：

MON88701-F：5’-GAAATGCAGAGTTACAAGAACATCC-3’(如SEQ ID NO.1所示)；

MON88701-R：5’-TGACGAATTCTGCAGAAGCTTG-3’(如SEQ ID NO.2所示)；

所述的检测探针如下所示：

MON88701-P：5’-CCAAAGCCCGGGCTTAATTAAGGC-3’(如SEQ ID NO.3所示)，探针的5’端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。

本发明的第四个目的是提供一种转基因棉花MON88701品系特异性实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取样品的基因组DNA作为模板；

(2)加入上述的检测引物和检测探针，与实时荧光定量PCR反应液及耐热DNA聚合酶混合形成扩增反应体系；

(3)将扩增反应体系在荧光PCP仪上进行实时荧光PCR反应，反应结束后，根据扩增曲线判断样品是否为转基因棉花MON88701品系。