[发明专利]一种新型酵母诱导型启动子及其应用

说明书

本发明提供了一种新型酵母诱导型启动子及其应用，属于分子生物学技术领域。其技术方案为：其为序列表中序列1所示的DNA序列；该启动子长度为673bp。本发明的有益效果为：本发明的酵母诱导型启动子DDI2，其可被氰胺高效诱导，启动子强度与已知诱导型强启动子GAL1相近，比组成型启动子ADH1强，且诱导时不用更换培养基，可通过诱导时间和诱导剂的量控制基因的表达量，与常用的GAL1启动子相比在时间成本和价格成本上更具优势。流式细胞仪检测结果显示DDI2启动子强度大于ADH1启动子,与GAL1启动子强度相近，且所需诱导时间少于GAL1启动子，不用更换培养基。通过Western和流式细胞仪检测结果，可以得到DDI2启动子强度在诱导物浓度为5‑8mM时达到最大。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种新型酵母诱导型启动子及其应用。

背景技术

细胞中基因的表达受到多种因素的影响，如顺式作用元件、反式作用因子等，在细胞生长阶段，与RNA聚合酶相联系的转录因子的表达水平及其它基因水平的调节有关。其中，启动子是启动特定基因转录的DNA序列，是基因表达调控的重要顺式元件,也是基因工程表达载体的一个重要组成部分。启动子功能的强弱对于目的基因的表达至关重要。

启动子含有特异性DNA序列，例如给RNA聚合酶和招募RNA聚合酶的转录因子提供可靠的初始结合位点。通常增高一个基因的表达量，会给它添加一个组成型的强启动子或诱导上调的启动子，降低或关闭一个基因的表达，会给添加一个弱启动子或诱导下调的启动子。通过更换启动子来调节基因的表达在改变酵母的代谢途径中得到了广泛应用。

酵母启动子有以下几种类型：(1)组成型：是指能够使基因在所有组织中都能启动表达的启动子，其不受外界条件的影响。这类启动子不需要诱导物或抑制物，所启动基因的表达具持续性。(2)诱导型：是指在某些特定的物理或化学信号的刺激下，该种类型的启动子可以大幅度地提高基因的转录水平。诱导型启动子能同时控制基因的表达量和基因的表达时间。在酿酒酵母中，一系列多种多样的内源诱导型启动子和改造过的诱导型启动子已被成功应用于基因表达的调控。其中在酿酒酵母中，最为严谨的调控性启动子是来自半乳糖诱导的基因GAL1、GAL7、GAL10。

上述两种酵母启动子中组成型启动子不表现时空特异性，不受诱导物的调控，不能随时调控基因的表达；诱导型启动子在酵母中最常用到的是P_GAL1,它可以被半乳糖诱导，但是在培养中需要先进行棉子糖饥饿处理后半乳糖诱导，更换培养基耗时耗力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型酵母诱导型启动子及其应用。

为实现上述发明目的，本发明是通过如下措施实现的：一种新型酵母诱导型启动子，为序列表中序列1所示的DNA序列；该启动子长度为673bp。

其中，制备过程为：

(一)酿酒酵母的基因组DNA提取：

①、收集5ml酵母细胞，离心(16000g,15s)后弃上清，加230ul DNA裂解液重悬菌体；

②、加入0.4g小玻璃珠，和200ul苯酚/氯仿/异戊醇的混合溶液，涡旋3min；其中，苯酚、氯仿和异戊醇的质量份数比为25:24:1；

③、离心(16000g,5min)后将水层转移到一个新的EP管中；

④、加600ul冰乙醇洗剂DNA,然后将EP管放在-20℃中30min；

⑤、在4℃下离心收集DNA(16000g,15min)，弃乙醇，在空气中干燥3min；

⑥、用200ul TE重悬DNA,加5ul RNA酶后37℃孵育10min；