[发明专利]一种竹节虾抗氧化肽及其制备方法

权利要求书

1.一种提高竹节虾抗氧化肽在生物体内稳定性的方法，其特征在于，所述竹节虾抗氧化肽的氨基酸序列为Gly-Asn-Gly-Leu-Pro，该竹节虾抗氧化肽通过以下方法制备：

(1)原料预处理：将竹节虾虾头清洗干净，去除脂质成分，匀浆绞成浆液备用；

(2)超声波辅助酶解：向上述浆液加入超纯水制成溶液，料液比为1:6～14w/v，调节pH值至中性，加入中性蛋白酶，45～65℃下超声波辅助酶解20～60min，酶解结束后，沸水灭活，离心取上清液得酶解溶液；

(3)超滤处理：将上述酶解溶液经超滤分离后，得分子量大于10kDa组、分子量范围为5～10kDa组、分子量范围为3～15kDa组以及分子量小于3kDa组，冻干后分别测定各组的DPPH清除率；

(4)凝胶柱处理：在滤膜超滤分离后获得的各组中，选取DPPH清除率最高的组加超纯水配制成溶液，脱盐后，经Sephadex G-25凝胶柱分离纯化，收集各峰，冻干后测定各组的DPPH清除率；

(5)反相高效液相色谱处理：在凝胶柱分离后获得的各组中，选取DPPH清除率最高的组分加超纯水配制成溶液，经滤膜过滤后用反相高效液相进行分离纯化，收集各洗脱峰，浓缩后分别测定各组的DPPH清除率，其中DPPH清除率最高的组即为所需的竹节虾抗氧化肽；

上述竹节虾抗氧化肽在生物体内稳定性的方法包括以下步骤：将所述竹节虾抗氧化肽和鸡卵清蛋白分别配置成同浓度的溶液，并在配置的竹节虾抗氧化肽溶液中加入上述鸡卵清蛋白溶液，且鸡卵清蛋白溶液与该竹节虾抗氧化肽溶液的体积比为1:4～6。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，超声频率为10～30kHz。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，洗脱液为超纯水，流速为1.0mL·min^-1。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，反相高效液相色谱的色谱条件为：采用C₁₈色谱柱4.6×250mm5μm，A相为含0.1％三氟乙酸的乙腈，B相为含0.1％三氟乙酸的超纯水，柱温25℃，流速1.0mL·min^-1，洗脱过程为：0％～100％B洗脱8min，15％～85％B洗脱17min，30％～70％B洗脱10min，0％～100％B洗脱5min。