[发明专利]一种以蓝藻干藻粉为原料的MC‑LR提取试验方法

说明书

技术领域

本发明属于水处理应用领域，具体涉及以干藻粉为原料的MC-LR提取的研究。

背景技术

水体富营养化使得蓝藻水华大面积爆发，引起的藻毒素(MC)污染问题，日益引起人们的关注，使得有关MC的研究成为当今环保、生物、医学等领域的热点问题之一。蓝藻多发生在夏季，但研究工作需全年开展，有的实验室远离湖泊，获取蓝藻困难，实验室培养的蓝藻相对较少，难以获取足够量的MC。商品化的藻毒素标样(纯品)昂贵，10ug高达3000元，使得实验室研究难以开展。常州位于太湖西北角，夏季东南风作用下，是太湖蓝藻主要聚集区域，每年夏秋2季打捞数千万吨的藻浆，经脱水后产生近万吨藻泥。

国内外有关学者对MCs的提取、提纯已有相关研究报道，如Bote等首先研究了MCs的提取、提纯方法。专利号为201010524841.4，公开了一种甲醇作为提取剂，过ODS柱精提、半制备色谱仪分离，得到微囊藻毒素的纯度在97％以上。专利号为02139093.2，公开了一种微囊藻毒素的提取纯化方法，用乙酸和甲醇浸泡，去除杂质、毒素分离，薄层层析等提取纯化，纯度达到90％以上。

本发明将浓藻浆离心脱水得到藻泥，藻泥置于阳光下暴晒，经球磨机研磨90min得到干藻粉，以干藻粉为原料筛选合适提取剂(甲醇、乙醇、乙酸、丁醇-甲醇-水混合溶液)，优化MC提取工艺参数，建立了一套“藻泥干化-干藻粉研磨-提取-富集-检测”提取路线，本发明可为实验室从事藻毒素毒性、化学或生物降解机制等研究工作提供商品化MC-LR。

发明内容

本发明的目的是针对实验室进行藻毒素(MC)相关研究过程中MC样品昂贵、难以获取这一难题，以太湖水体中的浓藻浆为研究对象，进行了MC提取。

本发明的技术方案如下：

一种以太湖蓝藻为原材料，将浓藻浆离心脱水得到藻泥，藻泥置于阳光下暴晒，经球磨机研磨90min 得到干藻粉，考察提取剂种类、干藻粉研磨时间、提取剂浓度、搅拌时间、微波消解工艺条件对MC提取量的影响，建立了一套“藻泥干化-干藻粉研磨-提取-富集-检测”提取路线。

本发明的主要优点：

本发明建立的这种以浓藻浆为原料，经过脱水、暴晒、研磨得到干藻粉，以甲醇等为提取剂的藻毒素提取方法，可为实验室从事藻毒素毒性、化学或生物降解机制等研究工作提供了便利。经测算，以甲醇为提取剂提取1g藻毒素成本仅402.67元。

附图说明

附图1为本发明晒干的蓝藻示意图；附图2为本发明研磨后的藻粉示意图。

具体实施方式

以太湖蓝藻为原料提取MC-LR。

1、蓝藻的采集与保存

太湖蓝藻爆发时期(每年6-9月)，从太湖蓝藻站收集浓藻浆，将浓藻浆离心脱水得到藻泥，将藻泥置于阳光下暴晒，晒干后保存。

2、藻粉的制备

取120g晒干的蓝藻，置于球磨罐中，加入磨球15个(直径r＝15mm)，转速400r/min，研磨90min，过120目筛，得到藻粉。

3、MC-LR的提取

称取藻粉放入100mL锥形瓶中，加入60mL提取剂，加入搅拌子放在磁力搅拌器上搅拌0.5-2.5小时，再将混合溶液超声振荡20min，然后再离心10min(转速4000r/min)，得到上清液。重复2次，将得到的上清液合并，在55℃条件下真空旋转蒸发，去除溶液中的提取剂。在粗提液中加入稀盐酸调节pH值至4，静置4h，可明显看到溶液中有絮状沉淀物，离心10min去除絮状物(4000r/min)，得到浅黄色上清液。在循环水式真空泵抽提下过0.45um滤膜，用稀氨水(5％)调节pH值为7，得到较为理想的粗提液。

4、MC-LR的纯化和富集

用50mL的玻璃注射器吸取10mL 100％甲醇溶液，然后缓慢注入到C18固相萃取小柱，自然滴下，当甲醇液面快要到萃取小柱上层筛片时，立即加入10mL超纯水活化C18固相萃取小柱，活化过程中不能使 C18小柱变干，将小柱和SPE固相萃取装置连接；将稀释1000倍的粗提液缓慢流过固相萃取小柱，富集浓缩，控制流速为4mL/min。富集结束后先用5mL10％甲醇溶液淋洗C18小柱，再用10mL洗脱溶液(用甲醇将三氟乙酸定容到100mL容量瓶中)洗脱MC-LR。洗脱液用氮气缓缓吹干，用5mL超纯水溶解，用注射器吸取溶解液经过一次性0.45um针头式过滤器，测定MC-LR提取量。

以下提供4个实施例进一步说明本发明。实施例用于说明本发明内容，而不是限定本发明内容。